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XLK2011木虫 (正式写手)
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[求助]
多重PCR，共有四个位点扩增，其中有一个位点的扩增效率很低，应该怎么调整反应体系？
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| 多重PCR，共有四个位点扩增，其中有一个位点的扩增效率很低。单独就这一个位点做单重PCR，扩增曲线还可以，多重PCR时，就很差，应该怎么调整反应体系？ |
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3楼2016-01-20 08:44:16
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:43:19
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:43:19
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单独扩增曲线OK，说明引物设计没有问题。而多重扩增出现一个点较弱，就体系而言，我建议： 1.增加那个较"弱"的点的引物量，或者/并且减少"强"点的引物量，这点比较难把握，因为不同基因序列相对的引物终浓度有明显的差异 (0.04–0.6 μ M) ，这很大程度上取决于经验。 2.至于其它的组分，如dNTP,MgCl2,Buffer,模板和酶甚至佐剂我都认为没有优化的必要。 你只是提问了“反应体系”，说明你对PCR循环参数什么的很有信心，我也就不画蛇添足了。 祝好运。 |
2楼2013-09-25 10:23:56
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