| 查看: 1362 | 回复: 2 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
XLK2011木虫 (正式写手)
|
[求助]
多重PCR，共有四个位点扩增，其中有一个位点的扩增效率很低，应该怎么调整反应体系？
|
|
| 多重PCR，共有四个位点扩增，其中有一个位点的扩增效率很低。单独就这一个位点做单重PCR，扩增曲线还可以，多重PCR时，就很差，应该怎么调整反应体系？ |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有283人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
已经有11人回复
- 荧光定量PCR扩增效率低
已经有16人回复
- 我做的定点突变一个位点，PCR无条带。。求高人指点。。
已经有9人回复
- 进行点突变的pcr，不能扩增出产物
已经有3人回复
- PBI121载体转化拟南芥，Tail-PCR扩增整合位点侧翼序列，为何只扩增得到载体部分序列？
已经有16人回复
- 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！
已经有19人回复
- PCR扩增出现的问题
已经有9人回复
- 关于real-time PCR温度优化的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
3楼2016-01-20 08:44:16
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:43:19
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:43:19
|
单独扩增曲线OK，说明引物设计没有问题。而多重扩增出现一个点较弱，就体系而言，我建议： 1.增加那个较"弱"的点的引物量，或者/并且减少"强"点的引物量，这点比较难把握，因为不同基因序列相对的引物终浓度有明显的差异 (0.04–0.6 μ M) ，这很大程度上取决于经验。 2.至于其它的组分，如dNTP,MgCl2,Buffer,模板和酶甚至佐剂我都认为没有优化的必要。 你只是提问了“反应体系”，说明你对PCR循环参数什么的很有信心，我也就不画蛇添足了。 祝好运。 |
2楼2013-09-25 10:23:56
