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wujiwuhui

铁虫 (正式写手)

[交流] 刚开始做实验,关于人总RNA的提取的若干问题! 已有2人参与

关于人RNA提取的几个很基础的问题,请大神们指点下,
1.已经知道电泳结果是三条带,5S,18S,28S,分别是120, 1874,4718个核苷酸组成,考虑到RNA是单链,就像网上说的,“28S 和 18S 分别位于 2.0kb 和 0.9kb 左右”,对吗?可从我的图来看,似乎28S是位于4k的最亮的那条带吧?这怎么解释呢?28S 和 18S到底在多少k的位置呢?
2.解释一下,第一个图是血液提取,第二个是组织提取的(效果不好),marker都是DNA的2k,第三个是网上别人提取的,我的问题是,第一个图看上去还可以(最亮的是28s吧?),可上面有两个亮点不知道是什么?难道是气泡?
3.为什么人家的图片点样孔那么清晰,我的确那么不明显呢?应该怎么点?
4.如果做RT的话对RNA完整性要求很高吗?FFPE做RT成功的几率有多大?没做过,纯请教。
灰常感谢!
刚开始做实验,关于人总RNA的提取的若干问题!
Administrator 2013-09-10 15hr 57min.jpg


刚开始做实验,关于人总RNA的提取的若干问题!-1
Administrator 2013-09-12 15hr 13min.jpg


刚开始做实验,关于人总RNA的提取的若干问题!-2
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songwang0516

银虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-17 08:41:25
关于第一个问题,我觉得4k处的应该不是RNA,估计是DNA污染。根据我们的经验RNA的28S和18S两条带应该在1K-2K之间。
第二个问题我觉得你的第二个图比第一个图要好。
胶孔的原因可能与配胶有关系,我建议你尽量用大孔胶,这样上图也好看。
2楼2013-09-16 10:00:28
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-17 08:41:35
提的不错,一张比一张好,最后一张很好,满足分子生物学实验
但愿人长久
3楼2013-09-16 13:08:45
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