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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 刚开始做实验，关于人总RNA的提取的若干问题！
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wujiwuhui

铁虫 (正式写手)

[交流] 刚开始做实验，关于人总RNA的提取的若干问题！ 已有2人参与

关于人RNA提取的几个很基础的问题，请大神们指点下，
1.已经知道电泳结果是三条带，5S,18S,28S，分别是120, 1874,4718个核苷酸组成，考虑到RNA是单链，就像网上说的，“28S 和 18S 分别位于 2.0kb 和 0.9kb 左右”，对吗？可从我的图来看，似乎28S是位于4k的最亮的那条带吧？这怎么解释呢？28S 和 18S到底在多少k的位置呢？
2.解释一下，第一个图是血液提取，第二个是组织提取的（效果不好），marker都是DNA的2k，第三个是网上别人提取的，我的问题是，第一个图看上去还可以（最亮的是28s吧？），可上面有两个亮点不知道是什么？难道是气泡？
3.为什么人家的图片点样孔那么清晰，我的确那么不明显呢？应该怎么点？
4.如果做RT的话对RNA完整性要求很高吗？FFPE做RT成功的几率有多大？没做过，纯请教。
灰常感谢！
刚开始做实验，关于人总RNA的提取的若干问题！
Administrator 2013-09-10 15hr 57min.jpg


刚开始做实验，关于人总RNA的提取的若干问题！-1
Administrator 2013-09-12 15hr 13min.jpg


刚开始做实验，关于人总RNA的提取的若干问题！-2
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1楼 2013-09-15 23:16:52
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songwang0516

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-17 08:41:25
关于第一个问题，我觉得4k处的应该不是RNA，估计是DNA污染。根据我们的经验RNA的28S和18S两条带应该在1K-2K之间。
第二个问题我觉得你的第二个图比第一个图要好。
胶孔的原因可能与配胶有关系，我建议你尽量用大孔胶，这样上图也好看。
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2楼2013-09-16 10:00:28
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-17 08:41:35
提的不错，一张比一张好，最后一张很好，满足分子生物学实验
赞一下 回复此楼
但愿人长久
3楼2013-09-16 13:08:45
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