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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » red敲除 pij778抗性实验求助！
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zhengwei188

木虫 (正式写手)

[求助] red敲除 pij778抗性实验求助！

你好，我的质粒做过一次敲除，用得是pij778，抗性自然是壮观霉素和链霉素，然后我用773再次敲除一次，抗性涂得 是安普霉素，结果长了满个平板，试过两次了还是这样，究竟是怎么回事呢，是不是pij778有这个抗性，我用的宿主是bw25113（pkd46）难道这个带安普抗性吗，求助谢谢！

[ 来自小组 药物化学家族 ]
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1楼2013-09-07 16:02:19
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 15:07:09
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengwei188 at 2013-09-24 09:29:20
我把液体LB放到42度一个小时，然后分成两个瓶，一个加了氨苄，在37度培养一夜发现还长哈！...

确保你挑单菌落。。
42°只是阻止质粒复制  不是让质粒消失，你放42°，菌又死不了，再放37°当然又长出来了
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2013-09-24 10:08:57
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhengwei188: 金币+1, 谢谢，我做 2013-09-14 12:01:20
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-15 13:45:26
你这个敲出很有问题啊，773也会会把778敲掉的，为什么不先做In-frame deletion。
赞一下(1人) 回复此楼
找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
2楼2013-09-08 22:42:53
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhengwei188: 金币+1, ★★★很有帮助, 那如何能让pkd46消失，然后保留菌株内只有我自己的质粒呢，求方法，谢谢！我在42度放置了一个小时，然后放到37度过夜养了一下， 发现还是会有菌产生，但是就是少一些！ 2013-09-14 12:07:42
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-15 13:45:42
zhengwei188: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-09-25 19:06:06
pkd46就是amp的  不过需要在30°长，在37°长得不太好就是了（但当然可以长出来，尤其bla还是分泌蛋白）
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2013-09-09 03:17:16
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zhengwei188

木虫 (正式写手)
如何能将pkd46去掉呢？
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4楼2013-09-14 12:10:45
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