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gsq0315

铜虫 (小有名气)


[交流] 半定量 内参条带不一致

做半定量,选16s做内参基因,经过不同循环数,相同模板,对照和实验组的内参表达不一致,没有规律性,请问该怎么办才能调一致
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gsq0315

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-09-02 17:46:17
用内参做标准,调整加入膜版量,基本相今后再跑实验组。然后对跑出来的条带进行定量。做数据处理就行了。

模板的量一般该怎样调整?
5楼2013-09-04 08:56:34
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yimingwang

金虫 (小有名气)


★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-09-02 23:23:50
用内参做标准,调整加入膜版量,基本相今后再跑实验组。然后对跑出来的条带进行定量。做数据处理就行了。
2楼2013-09-02 17:46:17
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15879003030

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-09-02 23:23:58
RT之前RNA要测OD260    RT是加的RNA量要一致。
3楼2013-09-02 22:07:38
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grape_vine

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-04 15:28:53
1, 调整模板量, 尽量让不同样品的内参在同一循环出现电泳带
2. 建议PCR过程中超过20个循环后, 在内参一致的情况下,每三个循环取5ul出来,最后到32或者35,然后一起跑胶做的好地话,可以相对比较准确的估计目的基因的表达差异。
4楼2013-09-03 08:09:34
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