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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 半定量 内参条带不一致
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gsq0315

铜虫 (小有名气)

[交流] 半定量 内参条带不一致

做半定量，选16s做内参基因，经过不同循环数，相同模板，对照和实验组的内参表达不一致，没有规律性，请问该怎么办才能调一致
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1楼 2013-09-02 08:49:31
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15879003030

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-02 23:23:58
RT之前RNA要测OD260    RT是加的RNA量要一致。
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3楼2013-09-02 22:07:38
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yimingwang

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-02 23:23:50
用内参做标准，调整加入膜版量，基本相今后再跑实验组。然后对跑出来的条带进行定量。做数据处理就行了。
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2楼2013-09-02 17:46:17
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grape_vine

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-04 15:28:53
1, 调整模板量, 尽量让不同样品的内参在同一循环出现电泳带
2. 建议PCR过程中超过20个循环后， 在内参一致的情况下，每三个循环取5ul出来，最后到32或者35，然后一起跑胶做的好地话，可以相对比较准确的估计目的基因的表达差异。
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4楼2013-09-03 08:09:34
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gsq0315

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-09-02 17:46:17
用内参做标准，调整加入膜版量，基本相今后再跑实验组。然后对跑出来的条带进行定量。做数据处理就行了。

模板的量一般该怎样调整？
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5楼2013-09-04 08:56:34
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