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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白分离纯化

现在做分离纯化,用的离子交换层析,穿过液中没有我的目的蛋白,说明已经挂在柱子上了,但是洗脱的时候也看不到我的目的蛋白了,洗脱时是用的0-0.5M的NaCl,然后用2M NaCl洗,都没有我的目的蛋白,有谁知道这是什么原因啊。。。真的是快被这个分离纯化搞疯了了,哪位大侠懂啊,帮帮忙啊,谢谢啦
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li1991511

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验! 2013-08-25 01:50:33
你分离的是什么蛋白啊 要看蛋白的带点性质 我们一直在做生长激素 离子柱 先得用2MNacL 一个柱体积处理一下 激活 再用1M NaoH--1M NaCl 3个柱体积前处理 再用0.04M Nacl--10mM TE 平衡 后上样 用0.1MNacl 洗脱 中间要控制流速 要控制好洗脱液的电导率 还有很多
这一年,异乡飘雪的日子。。。。。
4楼2013-08-24 12:35:16
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FTD顺

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-25 01:50:23
我的样品(小肽)0.05M就可以洗下来,有另外一个目标物(稍大的肽,吸附更牢)2M也可以洗下来。
个人认为你可以调下流动相pH,可能有效果。(NaCl溶液并不是理论的中性,而是酸性的)

你可以这样做:
做个静态吸附的,检测上清液,不断调pH检测。
不是很麻烦建议试试。
2楼2013-08-24 10:35:43
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by FTD顺 at 2013-08-24 10:35:43
我的样品(小肽)0.05M就可以洗下来,有另外一个目标物(稍大的肽,吸附更牢)2M也可以洗下来。
个人认为你可以调下流动相pH,可能有效果。(NaCl溶液并不是理论的中性,而是酸性的)

你可以这样做:
做个静态 ...

我还是不太明白要怎么做,您能说的再具体点吗?!
3楼2013-08-24 11:29:48
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by li1991511 at 2013-08-24 12:35:16
你分离的是什么蛋白啊 要看蛋白的带点性质 我们一直在做生长激素 离子柱 先得用2MNacL 一个柱体积处理一下 激活 再用1M NaoH--1M NaCl 3个柱体积前处理 再用0.04M Nacl--10mM TE 平衡 后上样 用0.1MNacl 洗脱 中间要 ...

我的蛋白是碱性蛋白,等电点在8左右,用的是阳离子柱,之前就有在用这种方法做分离纯化,没问题,只是最近才出现这种情况,是不是柱材用的久了柱效低了呀
5楼2013-08-24 12:40:23
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