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ZOEY21金虫 (小有名气)
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荧光标记引物的稀释
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去年1月合成的ssr荧光标记引物，干粉存于-20度。合成报告单找不到了，此为背景。 问题：1）荧光引物还能用吗？分型的话信号会不会减弱到测不到？ 2）现在要稀释干粉引物为100μM，合成报告单没有，荧光标记的正向引物管壁上有加入溶解液的量，普通反向引物管壁上没有注明。我就自己算啊，根据公式和引物序列分子量（没有考虑荧光标记分子量），再算需加溶解液的量，算出的荧光标记引物需要加溶解液的量与管壁上给出量不吻合，3管差1μl，1管差2μl，1管差3μl，2管差6μl，计算得到的量比较高。请问原因？是否因为加荧光标记后引物分子量增大。如此，反向引物能否按照计算所得稀释？ 写的太啰嗦，麻烦各位给掌眼了，谢谢！ p.s.引物分子量计算按如下公式：MW=（A碱基数×312）+（C碱基数×288）+（G碱基数×328）+（T碱基数×303）-61 |
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