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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光标记引物的稀释

去年1月合成的ssr荧光标记引物,干粉存于-20度。合成报告单找不到了,此为背景。
问题:1)荧光引物还能用吗?分型的话信号会不会减弱到测不到?
           2)现在要稀释干粉引物为100μM,合成报告单没有,荧光标记的正向引物管壁上有加入溶解液的量,普通反向引物管壁上没有注明。我就自己算啊,根据公式和引物序列分子量(没有考虑荧光标记分子量),再算需加溶解液的量,算出的荧光标记引物需要加溶解液的量与管壁上给出量不吻合,3管差1μl,1管差2μl,1管差3μl,2管差6μl,计算得到的量比较高。请问原因?是否因为加荧光标记后引物分子量增大。如此,反向引物能否按照计算所得稀释?
写的太啰嗦,麻烦各位给掌眼了,谢谢!
p.s.引物分子量计算按如下公式:MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

没有人回答 自己找到答案了
翻到了之前的合成单子,不是算法的问题,跟标记物也没有关系。计算所得液体量与报告单给出液体量不符是由于计算设定每OD核苷酸为33μg,而合成的寡聚核苷酸链每OD不定为33μg。
2楼2013-08-26 10:32:22
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