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muransun

新虫 (初入文坛)

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[求助] 如何得到microRNA的DNA序列

刚看到一篇博士论文，不明白miR-410的表达序列是如何得到（如何查找到这个序列），合成了正反DNA序列如何通过火退火得到DAN双链来插入质粒？
因为本人目前着手做miRNA方面的实验，需要得到mmu-miR-155前体序列，初步想法是提取小鼠的基因组，合成PCR引物，通过PCR扩增得到目的序列。所以看到这篇文章，是否我也可以合成miRNA表达序列，通过退火就可以得到目的序列呢？疑惑，希望有高手解答
谢谢

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1楼 2013-08-21 22:41:41

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longweichen

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 这是马甲 at 2013-09-17 09:07:20
前体序列的话，直接从基因组pcr就可以了吧~~~
找到该miRNA在基因组的具体定位（染色体，具体位置），然后设计引物pcr即可

如果构建primary microRNA过表达，只需要在pre-miRNA的两侧各加上100-200 bp的侧翼序列即可，很随意。就是加上双臂有利于miRNA的成熟、提高表达量。参考文献[1]。

1. 李嘉熙等，获得构建ｍｉＲＮＡ高表达载体的ｐｒｅ-ｍｉＲＮＡ及其侧翼ＤＮＡ序列的生物信息学方法，2013.

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尔东，njau10110119@163.com