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muransun

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何得到microRNA的DNA序列

刚看到一篇博士论文,不明白miR-410的表达序列是如何得到(如何查找到这个序列),合成了正反DNA序列如何通过火退火得到DAN双链来插入质粒?
因为本人目前着手做miRNA方面的实验,需要得到mmu-miR-155前体序列,初步想法是提取小鼠的基因组,合成PCR引物,通过PCR扩增得到目的序列。所以看到这篇文章,是否我也可以合成miRNA表达序列,通过退火就可以得到目的序列呢?疑惑,希望有高手解答
谢谢
如何得到microRNA的DNA序列
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longweichen

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 这是马甲 at 2013-09-17 09:07:20
前体序列的话,直接从基因组pcr就可以了吧~~~
找到该miRNA在基因组的具体定位(染色体,具体位置),然后设计引物pcr即可

如果构建primary microRNA过表达,只需要在pre-miRNA的两侧各加上100-200 bp的侧翼序列即可,很随意。就是加上双臂有利于miRNA的成熟、提高表达量。参考文献[1]。

1. 李嘉熙等,获得构建miRNA 高表达载体的pre-miRNA及其侧翼DNA 序列的生物信息学方法,2013.

----------------------------------

尔东,njau10110119@163.com
欢迎交流哦~
3楼2018-11-23 15:36:55
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这是马甲

至尊木虫 (著名写手)

谁的马甲都不是

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2013-09-17 09:58:53
前体序列的话,直接从基因组pcr就可以了吧~~~
找到该miRNA在基因组的具体定位(染色体,具体位置),然后设计引物pcr即可
这是一只什么都不懂的马甲~~~
2楼2013-09-17 09:07:20
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