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lyrmy

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2526640
注册: 2013-06-30
专业: 神经生物学

[求助] 含有大量重复序列的克隆

需要P一个promoter，但是含大量重复片段，每个重复在100bp左右。6kb内全是重复。

用过的酶：
dreamtaq，NEB Q5，NEB PHUSION

试过的方法：
DMSO
温度梯度，touch down
两段融合PCR
降低模板量

此外不仅是PCR问题。已设计不同长度promoter。一个跨过重复区的长度PCR出所需条带，问题是连不上！不论T载还是目的载体。

这克隆做了半年了，不知这里能否遇见大牛帮忙提出建议。

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1楼 2013-07-31 11:46:59

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