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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于primer5.0的问题
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illidanyy

木虫 (小有名气)

[求助] 关于primer5.0的问题

我的机器是64位系统 常用的primer5.0不兼容 然后就下载了某虫友共享的64位兼容的版本 ，之前用的时候一直很正常，但是前几天导入了一条叶绿体DNA的序列，结果出现了w、s、n等错误的碱基，感觉像是乱码，请教各位大神这个是怎么回事 谢谢~
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努力不一定有回报不努力一定没有回报
1楼 2013-07-06 09:44:55
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illidanyy

木虫 (小有名气)
请各位大神给点线索呗....
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努力不一定有回报不努力一定没有回报
2楼2013-07-08 11:17:27
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
大神设计引物是不需要用到软件的，直接用眼看就OK了。

我只是学到一点皮毛：
1. 在NCBI下载到待扩增序列（上下游各多200bp）.
2. 选定待扩增序列，在上下游分别找~20bp四碱基分布均匀的序列（3'末端最好有一个G或C，实在没有也没关系）.
3. 这对引物的两端各3个碱基不能出现互补.
4. 用这对引物在NCBI上Blast，看其在基因组上特异性——只要这对引物的3'端不是同时在非目标染色体上的匹配度都好，我们就说它的特异性好。
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3楼2014-01-31 23:08:31
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