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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测序正确了，为什么不能表达呢？
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[交流] 测序正确了，为什么不能表达呢？

psv2-DHFR载体自身没有带信号肽，加上一个EPO的分泌信号肽。载体改造好后也连GFP验证过了，可以发光，但不知道为什么连了一个目的蛋白就是不表达呢？大家有没有遇到此类情况？目的片段测序是正确的哦，连其他载体是可以表达的。非常困惑~~~
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1楼 2013-07-03 17:33:21
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yeyu541200

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是连上目的片段之后   序列移码了   有的时候在设计引物的时候得在前面加上适当数量的碱基，才能正确的表达，我知道PEGFP-N载体加DNA片段的时候，得在片段前加一个碱基！
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3楼2013-07-06 18:20:34
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wangtao89hf

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主做的可是通过双酶切将一段基因，与相同双酶切的绿色荧光蛋白质粒连接。新构建的质粒？求指导一下
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2楼2013-07-06 15:46:16
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yeyu541200

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肖颖2009: 金币+1, 谢谢~！ 2013-07-09 14:12:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by yeyu541200 at 2013-07-06 18:20:34
是不是连上目的片段之后   序列移码了   有的时候在设计引物的时候得在前面加上适当数量的碱基，才能正确的表达，我知道PEGFP-N载体加DNA片段的时候，得在片段前加一个碱基！

哦   错了  不是在前面  是 在片段后面加一个碱基   GFP荧光蛋白才表达  不加   后面的序列就 移码了  不发荧光      你用软件先连上片段看看能不能正确翻译
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4楼2013-07-06 18:28:57
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