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bishopsleeve

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于用对硝基苯酚法测脂肪酶活的问题 已有2人参与

根据文献方法
溶液A:30毫克的乙酸对硝基苯酯溶于90毫升的异丙醇中
溶液B:2.0gTriton X-100,0.5g阿拉伯树胶溶于450ml的磷酸缓冲溶液。
溶液A与溶液B以1:9混合(现配)得到反应基质。反应时取9ml反应基质预热5min,然后加入1ml酶液(空白以去离子水替代),反应十五分钟后在400nm处测吸光值。

我的问题是这个反应怎么终止呢?我试过各个文献中提到的放置于冰上;加10、15、20ml的95%乙醇;加5ml的三氯乙酸,然后用氢氧化钠调pH至加入三氯乙酸前。这些方法都不能完全终止反应,求指点~

有的文献中不终止反应,就在比色皿中进行反应,然后测酶活,再根据摩尔消光系数算。这样不准确吧?时间不好控制啊
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-07-02 22:31:30
不终止反应的话,属于动力学测定,即每个一定时间(如10、15、20、30秒)测定,记录吸光值后绘图,取其直线部分,求出斜率,计算酶活。
此法最好用具有动力学测定功能的分光光度计测定,如北京谱析1810S
2楼2013-07-02 21:23:58
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2013-12-05 20:23:55
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__tangtang__

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

请问你这种方法溶解乙酸对硝基苯酯能得到水溶液吗?会对酶活性产生影响吗?
最近在做相关实验,底物在水溶液中的溶解性不太好,求解答,谢谢!
4楼2017-09-18 10:51:51
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xj525

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by __tangtang__ at 2017-09-18 10:51:51
请问你这种方法溶解乙酸对硝基苯酯能得到水溶液吗?会对酶活性产生影响吗?
最近在做相关实验,底物在水溶液中的溶解性不太好,求解答,谢谢!

请问下你问题解决了嘛,是怎么样解决的呢,能否告知一下
5楼2018-10-08 13:27:31
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一季樱花

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xj525 at 2018-10-08 13:27:31
请问下你问题解决了嘛,是怎么样解决的呢,能否告知一下...

你解决了嘛!这个问题

发自小木虫Android客户端
6楼2018-11-20 09:51:11
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xj525

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 一季樱花 at 2018-11-20 09:51:11
你解决了嘛!这个问题
...

没有啊,你的底物在碱性条件下稳定不啊,我的PNPA在碱性条件下直接分解了
7楼2018-12-10 16:32:34
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