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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于用对硝基苯酚法测脂肪酶活的问题
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bishopsleeve

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于用对硝基苯酚法测脂肪酶活的问题 已有2人参与

根据文献方法
溶液A:30毫克的乙酸对硝基苯酯溶于90毫升的异丙醇中
溶液B：2.0gTriton X-100，0.5g阿拉伯树胶溶于450ml的磷酸缓冲溶液。
溶液A与溶液B以1：9混合（现配）得到反应基质。反应时取9ml反应基质预热5min，然后加入1ml酶液（空白以去离子水替代），反应十五分钟后在400nm处测吸光值。

我的问题是这个反应怎么终止呢？我试过各个文献中提到的放置于冰上；加10、15、20ml的95%乙醇；加5ml的三氯乙酸，然后用氢氧化钠调pH至加入三氯乙酸前。这些方法都不能完全终止反应，求指点~

有的文献中不终止反应，就在比色皿中进行反应，然后测酶活，再根据摩尔消光系数算。这样不准确吧？时间不好控制啊
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1楼 2013-07-01 14:03:17
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-07-02 22:31:30
不终止反应的话，属于动力学测定，即每个一定时间（如10、15、20、30秒）测定，记录吸光值后绘图，取其直线部分，求出斜率，计算酶活。
此法最好用具有动力学测定功能的分光光度计测定，如北京谱析1810S
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2楼2013-07-02 21:23:58
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2013-12-05 20:23:55
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__tangtang__

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你这种方法溶解乙酸对硝基苯酯能得到水溶液吗？会对酶活性产生影响吗？
最近在做相关实验，底物在水溶液中的溶解性不太好，求解答，谢谢！
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4楼2017-09-18 10:51:51
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xj525

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by __tangtang__ at 2017-09-18 10:51:51
请问你这种方法溶解乙酸对硝基苯酯能得到水溶液吗？会对酶活性产生影响吗？
最近在做相关实验，底物在水溶液中的溶解性不太好，求解答，谢谢！

请问下你问题解决了嘛，是怎么样解决的呢，能否告知一下
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5楼2018-10-08 13:27:31
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一季樱花

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xj525 at 2018-10-08 13:27:31
请问下你问题解决了嘛，是怎么样解决的呢，能否告知一下...

你解决了嘛！这个问题

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6楼2018-11-20 09:51:11
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xj525

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 一季樱花 at 2018-11-20 09:51:11
你解决了嘛！这个问题
...

没有啊，你的底物在碱性条件下稳定不啊，我的PNPA在碱性条件下直接分解了
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7楼2018-12-10 16:32:34
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