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铜虫 (正式写手)

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[求助] DNA片段化问题

大侠们帮我看看这种提取肿瘤细胞DNA的方法好不好有没有更好的方法。    收集细胞1*10^6个细胞离心1000r/3min,再用PBS洗两次加入100微升的裂解液 4度1小时。 25000R/15min 收集上清液加入1微升RNaseA37°，1h. 再加入1微升蛋白酶K37° 3h.再加入20微升5M的Nacl 120微升的异丙醇-20°过夜，第二天 25000R/15min收集沉淀加TE溶解后测试。    我最近就按照这个方法提取DNA 可是总是效果不好我师姐们都是按照这个方法提取的  希望大神们指点下方法中需要注意的地方。

   我将25000R/15min 收集上清液  这不改为瞬时离心取上清液可行不。
  这个就是上次我改完后的图结果没有出ladder . 哪位大侠能帮我解答一下不胜感激

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1楼 2013-06-25 13:00:58

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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

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【答案】应助回帖

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7782663(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-25 16:58:10

提的过程中降解或断裂了。。应该4°离心，用预冷的PBS吹打，裂解液可以多加些。50°水浴。。。还有70%乙醇洗两遍。你的样品有蛋白残留。。。祝顺利