| 查看: 6284 | 回复: 15 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
RAW264.7细胞的培养问题-----传代、冻存和复苏已有1人参与
|
||||
|
RAW264.7细胞的培养总遇到问题。 这个细胞我是从别人那里要的。 第一次要来之后，冻存了一批，在-80℃中可以复苏成功，于是把种子细胞扔掉了，并且把冻存细胞转入液氮。后来药品到了，复苏细胞做实验时，却怎么都不能成功。 第二次厚着脸皮跟别人又要来一次，回来了大量扩增冻存，转入液氮。这次留了一个心眼，种子细胞没有丢掉。但是现在转入液氮的细胞怎么都不能复苏成功，种子细胞已经传到10次以上，生长速度变得很慢，状态倒是还可以。 有没有在培养RAW264.7细胞方面很有经验的前辈给我传授下经验？？本人万分感谢。 我的传代方法：弃去旧培养液，加入新鲜的培养液，用移液器反复吹打，然后一分为二转至两个新平皿，每皿补足5ml的培养体积。 我的冻存方法： 冻存液是血清：DMSO=9:1。冻存采用 4℃20min, -20℃20min,-80℃过夜，然后转入液氮。 我的复苏方法：从液氮中取出冻存的细胞，37-39℃下快速融化冻存的细胞液，用PBS缓冲液1500rpm离心3min，弃上清，用5ml培养基将细胞沉淀吹匀。 每次从液氮中复苏的细胞都死掉，几乎不能存活。但是之前有一次从-80℃中却可以成功复苏。现在等着用它来多肽对内毒素的抑制活性，愁死了。 希望好心人帮一下。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞培养技术 | 分子细胞生物学实验 |
» 猜你喜欢
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有7人回复
-
申请2026年博士
已经有5人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有5人回复
-
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有6人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有7人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有6人回复
-
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了
已经有7人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有4人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
第一次复苏细胞，居然活了！
已经有7人回复- 本人培养HEK293TD细胞遇到的问题
已经有9人回复
- 巨噬细胞264.7是这个状态吗？
已经有4人回复
- 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？
已经有22人回复
- RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？
已经有24人回复
- 新手关于贴壁癌细胞传代的一些小问题，请教各位高手
已经有15人回复
- 离心收集的细胞能在-80度冻存吗？
已经有7人回复
- hepg2 细胞复苏
已经有34人回复
- 组织-80℃冻存几天后解冻能否进行原代培养？
已经有4人回复
- RAW264.7细胞复苏总是失败
已经有7人回复
- 如何培养HeLa细胞
已经有4人回复
- sf9细胞贴壁培养后如何传代
已经有3人回复
- HUVEC培养问题
已经有4人回复
- 多种细胞的培养方法
已经有53人回复
- 有人养过HuH-7细胞吗
已经有5人回复
- 我的RAW264.7细胞为什么一直分化，实验无法进行啊，非常感谢
已经有8人回复
- RAW264.7细胞长得很慢吗？
已经有12人回复
- 【求助/交流】细胞刮刀的使用
已经有9人回复
- 【求助】关于RAW 264.7细胞培养的问题 求助！！
已经有25人回复
vivien520584
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 309.5
- 红花: 1
- 帖子: 134
- 在线: 60.6小时
- 虫号: 868393
- 注册: 2009-10-11
- 性别: MM
- 专业: 抗炎与免疫药物药理
6楼2013-10-18 09:58:40