| 查看: 7347 | 回复: 15 | |||||
[求助]
RAW264.7细胞的培养问题-----传代、冻存和复苏 已有1人参与
|
|||||
|
RAW264.7细胞的培养总遇到问题。 这个细胞我是从别人那里要的。 第一次要来之后，冻存了一批，在-80℃中可以复苏成功，于是把种子细胞扔掉了，并且把冻存细胞转入液氮。后来药品到了，复苏细胞做实验时，却怎么都不能成功。 第二次厚着脸皮跟别人又要来一次，回来了大量扩增冻存，转入液氮。这次留了一个心眼，种子细胞没有丢掉。但是现在转入液氮的细胞怎么都不能复苏成功，种子细胞已经传到10次以上，生长速度变得很慢，状态倒是还可以。 有没有在培养RAW264.7细胞方面很有经验的前辈给我传授下经验？？本人万分感谢。 我的传代方法：弃去旧培养液，加入新鲜的培养液，用移液器反复吹打，然后一分为二转至两个新平皿，每皿补足5ml的培养体积。 我的冻存方法： 冻存液是血清：DMSO=9:1。冻存采用 4℃20min, -20℃20min,-80℃过夜，然后转入液氮。 我的复苏方法：从液氮中取出冻存的细胞，37-39℃下快速融化冻存的细胞液，用PBS缓冲液1500rpm离心3min，弃上清，用5ml培养基将细胞沉淀吹匀。 每次从液氮中复苏的细胞都死掉，几乎不能存活。但是之前有一次从-80℃中却可以成功复苏。现在等着用它来多肽对内毒素的抑制活性，愁死了。 希望好心人帮一下。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞培养技术 | 分子细胞生物学实验 |
» 猜你喜欢
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有15人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。
已经有11人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有12人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有7人回复
-
哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 第一次复苏细胞，居然活了！
已经有7人回复
- 本人培养HEK293TD细胞遇到的问题
已经有9人回复
- 巨噬细胞264.7是这个状态吗？
已经有4人回复
- 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？
已经有22人回复
- RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？
已经有24人回复
- 新手关于贴壁癌细胞传代的一些小问题，请教各位高手
已经有15人回复
- 离心收集的细胞能在-80度冻存吗？
已经有7人回复
- hepg2 细胞复苏
已经有34人回复
- 组织-80℃冻存几天后解冻能否进行原代培养？
已经有4人回复
- RAW264.7细胞复苏总是失败
已经有7人回复
- 如何培养HeLa细胞
已经有4人回复
- sf9细胞贴壁培养后如何传代
已经有3人回复
- HUVEC培养问题
已经有4人回复
- 多种细胞的培养方法
已经有53人回复
- 有人养过HuH-7细胞吗
已经有5人回复
- 我的RAW264.7细胞为什么一直分化，实验无法进行啊，非常感谢
已经有8人回复
- RAW264.7细胞长得很慢吗？
已经有12人回复
- 【求助/交流】细胞刮刀的使用
已经有9人回复
- 【求助】关于RAW 264.7细胞培养的问题 求助！！
已经有25人回复
vivien520584
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 309.5
- 红花: 1
- 帖子: 134
- 在线: 60.6小时
- 虫号: 868393
- 注册: 2009-10-11
- 性别: MM
- 专业: 抗炎与免疫药物药理
6楼2013-10-18 09:58:40
5楼2013-10-17 22:17:42
wolfman840
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 225 (大学生)
- 金币: 3524.8
- 散金: 20
- 红花: 12
- 帖子: 702
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 902627
- 注册: 2009-11-14
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
2楼2013-06-20 16:05:42
3楼2013-06-21 09:06:23
4楼2013-06-21 10:11:56
7楼2013-10-18 13:45:08
8楼2014-02-19 14:19:36
9楼2014-02-25 08:37:02
10楼2015-01-16 21:36:35
5
投票: