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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

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[交流] RNA逆转录DNA已有9人参与

请教：用Takara的逆转录试剂盒，推荐程序为37度15分钟，85度15秒，PCR仪上设置为37度15分钟，85度15秒，end.逆转录完后晚了20分钟将产物拿出，会影响cDNA得率吗？

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1楼2013-06-02 15:29:04

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porphybaby

金虫 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:18:02

不会的

因为你85℃ 15 s 目的就是让反转录酶失活终止反转录反应自从这个之后你原先体系有多少cDNA 就是多少了不会再增多也不会说再减少

因为已经转成了 cDNA 它已经不再是RNA 因此没那么脆弱不容易降解你接下来的操作都可以在外面进行

另外我不知道你的意思是 85℃ 持续了20分钟还是说 85℃结束后停止加热恢复到室温 20分钟后你取出

如果你是持续加热那么长时间的话可能会有一定影响吧