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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

[交流] RNA逆转录DNA已有9人参与

请教：用Takara的逆转录试剂盒，推荐程序为37度15分钟，85度15秒，PCR仪上设置为37度15分钟，85度15秒，end.逆转录完后晚了20分钟将产物拿出，会影响cDNA得率吗？
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1楼2013-06-02 15:29:04
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by soarrow at 2013-06-04 00:59:04
P事没有
我们实验室常用的RT-PCR盒子，37-50度反转录完了得95度15分钟，激活DNA聚合酶
DNA比RNA稳定多了，放心吧

放心了，3Q
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8楼2013-06-04 09:05:46
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710002191

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-02 16:14:03
应该不会的吧，DNA在常温可能会降解，但是就半个小时应该没什么问题吧，一般放-20的话可以长期保存的，我们前段时间用了一个在-20保存了一年的逆转录得到的DNA也是一点问题没有的
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may
2楼2013-06-02 15:55:54
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porphybaby

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:18:02
不会的

因为你85℃ 15 s 目的就是让 反转录酶 失活 终止反转录反应 自从这个之后 你原先体系有多少cDNA 就是多少了 不会再增多 也不会说 再减少

因为已经转成了 cDNA 它已经不再是RNA 因此没那么脆弱 不容易降解 你接下来的操作 都可以在外面进行

另外我不知道你的意思是 85℃ 持续了20分钟 还是 说 85℃结束后 停止加热 恢复到室温 20分钟后你取出

如果你是 持续加热那么长时间的话 可能会有一定影响吧
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4楼2013-06-03 00:06:35
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
P事没有
我们实验室常用的RT-PCR盒子，37-50度反转录完了得95度15分钟，激活DNA聚合酶
DNA比RNA稳定多了，放心吧
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7楼2013-06-04 00:59:04
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