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各位大神。。最近在做PCR，然后琼脂糖凝胶电泳。。胶跑成了这样。。请问各位这可能是为什么。。希望大家伸出援助之手啊。。小弟刚刚开始做这方面。。 01.JPG |
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rxh19891220
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8楼2013-06-03 10:12:12
zhoulubin
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2楼2013-06-01 14:39:58
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是啊。。。新手 ，胶浓度是1.5%的，上样量是6微升。从右边依次是marker，然后剩下四条带分别是用两种不同引物扩增自己用试剂盒提取的质粒的产物，第一条和第三条是同一种引物，第二条和第四条是同一种引物。感觉是不是拖尾有点严重。。而且从左边数的第二条带怎么会有那么亮的一条。。  PCR程序是：94度 5min 94度 45s 59度 45s 72度 45s 29循环 72度 10min 反应体系应该问题不大吧，我按照PCR试剂盒的说明书的量加的 试剂 终浓度 50 µl体系 Sterilized ddH2O - 20.8 µl 10×PCR Buffer 1× 5 µl dNTP Mix 0.2 mmol/L 5 µl Primer 1 1 µmol/L x 5 µl Primer 2 1 µmol/L x 5 µl Taq DNA Polymerase 1 U 0.2 µl MgCl2 4 mmol/L 8 µl 模板 10 pg-1 µg 1 µl 多谢啊！！ |
3楼2013-06-01 15:06:15
zhoulubin
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4楼2013-06-01 16:35:30