24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 782  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

李小冬

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆,转化,全长cDNA克隆,表达目的蛋白。PMD18-

弱弱的问一句,做真核表达,前期步骤目的片段TA克隆,正反向的连接概率是50%么?
转化,筛选纯化,挑去的白色菌落,加入液体培养基,提取质粒,按上面的方法,结果是正向的。这个结果是能说明我加入的培养基内的单个菌落都是正向,还是,只是我提取的一部分质粒是? 质粒间的互不相容性 ,在这里试用么?

谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

哎呀呀
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小冬

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-29 17:58:53
不用考虑片段在T载体上的方向,设计好酶切位点,切下来装目标载体即可

理论上做TA克隆时,片段在T载体上正反向概率是50%,实际上可能不是,我经常碰到要么都是正向,要么都是反向的情况

不好意思,我才发现童虫只能回帖评分一次?
那也就是,我按2楼的方法,然后验证方向,就可以继续往下做呗?
哎呀呀
5楼2013-05-29 19:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

李小冬

金虫 (小有名气)

那个上面的方法,那句话整错了,如果谁哟好的方法,也知道我一下呗。谢谢
哎呀呀
2楼2013-05-29 11:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
李小冬(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 17:56:15
李小冬: 金币+9, ★★★很有帮助 2013-05-29 18:59:29
要做菌落PCR进行验证,验证插入片段的大小入方向的正确性.
再划线,挑单菌落PCR进行验证,然后才去摇菌,
3楼2013-05-29 15:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用考虑片段在T载体上的方向,设计好酶切位点,切下来装目标载体即可

理论上做TA克隆时,片段在T载体上正反向概率是50%,实际上可能不是,我经常碰到要么都是正向,要么都是反向的情况

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-05-29 17:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288资源与环境专硕求调剂,不限专业,有学上就行 +11 lllllos 2026-03-30 11/550 2026-03-30 21:19 by 研究僧导导
[考研] 292求调剂 +13 是妍子也是研子 2026-03-30 13/650 2026-03-30 18:01 by 小徐0109
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +3 lmnlzy 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:49 by wangjy2002
[考研] 化学308分调剂 +7 你好明天你好 2026-03-30 8/400 2026-03-30 13:02 by 你好明天你好
[考研] 南京大学化学调剂 +10 景随风 2026-03-29 15/750 2026-03-30 11:21 by limeifeng
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 调剂求院校招收 +6 鹤鲸鸽 2026-03-28 6/300 2026-03-29 08:15 by fmesaito
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 复试调剂,一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
信息提示
请填处理意见