24小时热门版块排行榜    

查看: 912  |  回复: 5

李小冬

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆,转化,全长cDNA克隆,表达目的蛋白。PMD18-

弱弱的问一句,做真核表达,前期步骤目的片段TA克隆,正反向的连接概率是50%么?
转化,筛选纯化,挑去的白色菌落,加入液体培养基,提取质粒,按上面的方法,结果是正向的。这个结果是能说明我加入的培养基内的单个菌落都是正向,还是,只是我提取的一部分质粒是? 质粒间的互不相容性 ,在这里试用么?

谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

哎呀呀
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小冬

金虫 (小有名气)

那个上面的方法,那句话整错了,如果谁哟好的方法,也知道我一下呗。谢谢
哎呀呀
2楼2013-05-29 11:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
李小冬(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 17:56:15
李小冬: 金币+9, ★★★很有帮助 2013-05-29 18:59:29
要做菌落PCR进行验证,验证插入片段的大小入方向的正确性.
再划线,挑单菌落PCR进行验证,然后才去摇菌,
3楼2013-05-29 15:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用考虑片段在T载体上的方向,设计好酶切位点,切下来装目标载体即可

理论上做TA克隆时,片段在T载体上正反向概率是50%,实际上可能不是,我经常碰到要么都是正向,要么都是反向的情况

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-05-29 17:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小冬

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-29 17:58:53
不用考虑片段在T载体上的方向,设计好酶切位点,切下来装目标载体即可

理论上做TA克隆时,片段在T载体上正反向概率是50%,实际上可能不是,我经常碰到要么都是正向,要么都是反向的情况

不好意思,我才发现童虫只能回帖评分一次?
那也就是,我按2楼的方法,然后验证方向,就可以继续往下做呗?
哎呀呀
5楼2013-05-29 19:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by 李小冬 at 2013-05-29 19:03:43
不好意思,我才发现童虫只能回帖评分一次?
那也就是,我按2楼的方法,然后验证方向,就可以继续往下做呗?...

方向在你设计酶切位点的就定下来了,只要你测序后序列没有问题,就可以往下面做了
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-05-29 19:23:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 李小冬 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 8/400 2026-08-15 11:53 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +25 医学老男孩 2026-08-13 52/2600 2026-08-15 11:49 by 大快人心啦
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见