应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DGGE 切胶溶胶问题
51/1返回列表
查看: 1389  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小果冻524

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE 切胶溶胶问题

以前一直做DGGE，切胶后也不捣碎，直接加30ul水溶了立即做PCR，效果都很好；但是从三月底开始切胶后一直做不出PCR，有时候能出来也有很多拖尾，一直到现在我试了琼脂糖胶的试剂盒回收，试了捣碎煮沸和水浴各种方法，都不理想，都两个月了切胶一直不能溶不出模板来，我都快崩溃了，不知道问题到底出现在哪里！！用的GELRED染色，梯度35%-65%，扩增长度400多不到500bp，以前超好的我都没想到过溶胶也会容不出来的，现在收到了巨大的打击！！请大家帮我分析下吧！感谢感谢！！
DGGE 切胶溶胶问题
3.15.jpg  这个是以前做的好的时候的溶胶后PCR图


DGGE 切胶溶胶问题-1
4.10.jpg 这个就是后来的差的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-20 16:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robinlw

新虫 (初入文坛)
出现过类似的问题，建议lz用好一点的taq酶，我换了exTAQ就解决了，其实溶胶倒不是大问题
我们的做法一般是：切下的胶捣碎后加入1×TE溶解，-20℃过夜冻融，直接取1ul用作模板做扩增
赞一下 回复此楼
10楼2013-11-19 14:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wubingqi

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
捣碎后加入30uL水，4℃冰箱过夜，即可。
原因可能有多重，先试试的调整下PCR体系，先从加入的DNA模版量开始，0.1微升-5微生物，选择几个梯度试一下。然后最好换下pcr试剂。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-20 18:01:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小果冻524

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wubingqi at 2013-05-20 18:01:27
捣碎后加入30uL水，4℃冰箱过夜，即可。
原因可能有多重，先试试的调整下PCR体系，先从加入的DNA模版量开始，0.1微升-5微生物，选择几个梯度试一下。然后最好换下pcr试剂。

首先谢谢你的回复，然后我觉得跟PCR体系和程序没有关系，因为用之前的溶胶液做PCR都是很好的，我觉得还是溶胶没溶出DNA，有时候行有时候不行，大部分不行
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-20 21:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小果冻524: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2013-05-28 10:14:02
加水后4℃过夜或多泡几天，一般都能洗脱，如果没有，可能就是切胶的时候紫外照射时间太长，DNA被照段了~
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-20 21:37:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-13 11:37 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:30 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:14 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:24 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:00 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭