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tradaisy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 液相梯度洗脱压力不稳,最终将为0

洗脱程序:
时间(分钟)        流动相A(%)        流动相B(%)        洗脱
0-10                           68.5                                31.5                        等度
10-22                       68.5→52.5        31.5→47.5        线性梯度
22-30                            52.5                                 47.5        等度
30-40                          52.5→26        47.5→74                       线性梯度
40-50                              26                                  74                         等度
流动相A相:磷酸二氢铵约5.75g,溶解于1000mL超纯水中,混匀,用磷酸调节pH到3.5,用0.45μm水系滤膜过滤,取上述溶液与乙腈按19:1比例混合,摇匀,脱气;
流动相B相:乙腈;
每次检样时,随着序列的进行,刚开始压力正常,但是走着走着压力就掉下来了,而且每次都是运行到48min左右时,压力就出现波动,然后在后运行中压力降为0了
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天助自助者
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流,欢迎常来! 2013-05-15 22:04:28
乙腈水体系在75左右时,粘度最大,这个时候溶剂的压缩因子会出现突变,尤其在加入缓冲盐的体系中,表现更为明显,所以会造成压力上下波动,另外不知道你后运行是什么条件,后运行的过程中流动相比例又要回归到开始进样的条件下,此时体系由高有机相向高缓冲盐体系过渡,会使得主动阀阀芯有较大的磨损,暂停工作,所以压力会为0.
建议流动相使用前好好脱气,有条件的话,对于二元泵体系最好加上脱气机,效果会好一些。
用文字走路,用行动分析
2楼2013-05-15 21:25:04
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yan1984

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为乙腈比例高了以后磷酸二氢铵的溶解度不好会析出,所以导致压力波动厉害最后降为0,我也碰到过这个问题。建议更改条件,如果不能更改,建议结束后用约60度的水进行冲洗。
3楼2013-05-16 11:29:18
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swallow13

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2013-05-16 12:33:58
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j115090587

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
后运行压力为零,是长时间这样吗?还是瞬间?我们这边也经常有这样类似的梯度,没出现过因为盐析,而压力为零!
5楼2013-05-17 08:21:56
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alice81189

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

磷酸盐在乙腈中大部分都是微溶的,最后的乙腈这么高的浓度,缓冲盐很有可能会析出哦,但是我只试过会堵柱子然后压力飙升,至于压力掉为零的话,难道是泵被析出的盐磨损了然后就停了?
6楼2013-05-31 17:21:40
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

用的是什么型号仪器

磷酸盐浓度确实大了些,如果非要这么浓,建议用有机胺
中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
7楼2013-06-01 10:26:03
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-05-15 21:25:04
乙腈水体系在75左右时,粘度最大,这个时候溶剂的压缩因子会出现突变,尤其在加入缓冲盐的体系中,表现更为明显,所以会造成压力上下波动,另外不知道你后运行是什么条件,后运行的过程中流动相比例又要回归到开始进 ...

乙腈水体系在乙腈比例为20左右时黏度最大。
悲催的研发!
8楼2013-06-03 15:26:54
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有可能是你盐浓度过高,有机相比例提高时盐析出造成单向阀不能正常工作。另外安捷伦的四元泵的话,多通道梯度洗脱阀下面两根管路走水相,上面两管路走有机相
悲催的研发!
9楼2013-06-03 15:29:30
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