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liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] GUS染色染不上的原因 已有2人参与

我用基因枪做瞬时表达分析,一共构建了14个表达载体,报告基因是GUS,转化农杆菌之后,用质粒打基因枪,材料是温室玉米的约2.5mm的胚。第一次打枪后用GUS染液染色,都有蓝色,而且很明显。隔了三个月之后,又做一次平行(一切实验条件和用具都一样),材料还是温室玉米的约2.5mm的胚。结果染色特别浅,而且有的没染上色。请高手解答一下,这是什么原因造成的?GUS染液应该没问题的
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liyeer

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 14:49:39
如果是这样的话估计跟胚的状态,农杆菌的状态有关系

打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚,第一次也是这样的胚
3楼2013-05-13 17:21:50
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cjzyfx

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是这样的话估计跟胚的状态,农杆菌的状态有关系
迷茫的蚊子
2楼2013-05-13 14:49:39
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cjzyfx

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-13 17:21:50
打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚,第一次也是这样的胚...

首先,质粒就是质粒,没有什么农杆菌,大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的,所以农杆菌状态可排除,每一批胚尽管都是2.5mm的,但是可能它的状态会差别很大,还有染色液,同样的染色液,染不同批次的东西结果也会有差别,跟材料的状态,环境的变化都有关系,再者,你这属于瞬时表达,结果重复性很差,也正常
迷茫的蚊子
4楼2013-05-13 17:36:07
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liyeer

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 17:36:07
首先,质粒就是质粒,没有什么农杆菌,大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的,所以农杆菌状态可排除,每一批胚尽管都是2.5mm的,但是可能它的状态会差别很大,还有染色液,同样的染色液,染不同批次的东 ...

很精辟的回答!!!!!!!!受益匪浅
不好意思,再请教一下:瞬时表达应该做几个平行呢?如果平行之间差异很大,该怎么处理呢?
5楼2013-05-13 17:57:51
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