应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » GUS染色染不上的原因
111/2返回列表12下一页
查看: 8359  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] GUS染色染不上的原因 已有2人参与

我用基因枪做瞬时表达分析，一共构建了14个表达载体，报告基因是GUS，转化农杆菌之后，用质粒打基因枪，材料是温室玉米的约2.5mm的胚。第一次打枪后用GUS染液染色，都有蓝色，而且很明显。隔了三个月之后，又做一次平行（一切实验条件和用具都一样），材料还是温室玉米的约2.5mm的胚。结果染色特别浅，而且有的没染上色。请高手解答一下，这是什么原因造成的？GUS染液应该没问题的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-13 11:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cjzyfx

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-13 17:21:50
打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚，第一次也是这样的胚...

首先，质粒就是质粒，没有什么农杆菌，大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的，所以农杆菌状态可排除，每一批胚尽管都是2.5mm的，但是可能它的状态会差别很大，还有染色液，同样的染色液，染不同批次的东西结果也会有差别，跟材料的状态，环境的变化都有关系，再者，你这属于瞬时表达，结果重复性很差，也正常
赞一下(1人) 回复此楼
迷茫的蚊子
4楼2013-05-13 17:36:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjzyfx

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-14 08:39:35
稳定转化同时也在做。稳定表达周期太长，我们实验室是做玉米的。玉米的转化率太低，构建的载体有14个，只有一两个构建能得到转化苗（按经验），而且转化事件不足10个。这样的结果完全不够啊。
我是硕士，就想着如 ...

瞬时表达是比较快，但是也有它的弊端，要想实验结果准确，最好是做的重复数多些，以降低误差
赞一下(1人) 回复此楼
迷茫的蚊子
8楼2013-05-14 09:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haiyanciniao

金虫 (著名写手)

自立自强自爱自律
多做几次吧，总结失败原因
赞一下(1人) 回复此楼
自立自强自爱自律，我就是我自己的神，在我活的地方！相信自己，相信未来。加油
9楼2013-05-14 11:32:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cjzyfx

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是这样的话估计跟胚的状态，农杆菌的状态有关系
赞一下 回复此楼
迷茫的蚊子
2楼2013-05-13 14:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 14:49:39
如果是这样的话估计跟胚的状态，农杆菌的状态有关系

打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚，第一次也是这样的胚
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-13 17:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 17:36:07
首先，质粒就是质粒，没有什么农杆菌，大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的，所以农杆菌状态可排除，每一批胚尽管都是2.5mm的，但是可能它的状态会差别很大，还有染色液，同样的染色液，染不同批次的东 ...

很精辟的回答！！！！！！！！受益匪浅
不好意思，再请教一下：瞬时表达应该做几个平行呢？如果平行之间差异很大，该怎么处理呢？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-13 17:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjzyfx

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-13 17:57:51
很精辟的回答！！！！！！！！受益匪浅
不好意思，再请教一下：瞬时表达应该做几个平行呢？如果平行之间差异很大，该怎么处理呢？...

瞬时表达本身就不靠谱，何不做稳定表达
赞一下 回复此楼
迷茫的蚊子
6楼2013-05-13 20:20:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 20:20:15
瞬时表达本身就不靠谱，何不做稳定表达...

稳定转化同时也在做。稳定表达周期太长，我们实验室是做玉米的。玉米的转化率太低，构建的载体有14个，只有一两个构建能得到转化苗（按经验），而且转化事件不足10个。这样的结果完全不够啊。
我是硕士，就想着如果瞬时表达结果完整的话，就用瞬时的结果毕业
可是瞬时的实验也不顺利……
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-14 08:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-14 09:04:00
瞬时表达是比较快，但是也有它的弊端，要想实验结果准确，最好是做的重复数多些，以降低误差...

恩，非常感谢！！！！！
回复此楼
10楼2013-05-15 16:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liyeer 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭