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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » GUS染色染不上的原因
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liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] GUS染色染不上的原因 已有2人参与

我用基因枪做瞬时表达分析，一共构建了14个表达载体，报告基因是GUS，转化农杆菌之后，用质粒打基因枪，材料是温室玉米的约2.5mm的胚。第一次打枪后用GUS染液染色，都有蓝色，而且很明显。隔了三个月之后，又做一次平行（一切实验条件和用具都一样），材料还是温室玉米的约2.5mm的胚。结果染色特别浅，而且有的没染上色。请高手解答一下，这是什么原因造成的？GUS染液应该没问题的
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1楼 2013-05-13 11:02:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cjzyfx

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-13 17:21:50
打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚，第一次也是这样的胚...

首先，质粒就是质粒，没有什么农杆菌，大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的，所以农杆菌状态可排除，每一批胚尽管都是2.5mm的，但是可能它的状态会差别很大，还有染色液，同样的染色液，染不同批次的东西结果也会有差别，跟材料的状态，环境的变化都有关系，再者，你这属于瞬时表达，结果重复性很差，也正常
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迷茫的蚊子
4楼2013-05-13 17:36:07
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cjzyfx

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-14 08:39:35
稳定转化同时也在做。稳定表达周期太长，我们实验室是做玉米的。玉米的转化率太低，构建的载体有14个，只有一两个构建能得到转化苗（按经验），而且转化事件不足10个。这样的结果完全不够啊。
我是硕士，就想着如 ...

瞬时表达是比较快，但是也有它的弊端，要想实验结果准确，最好是做的重复数多些，以降低误差
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迷茫的蚊子
8楼2013-05-14 09:04:00
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haiyanciniao

金虫 (著名写手)

自立自强自爱自律
多做几次吧，总结失败原因
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自立自强自爱自律，我就是我自己的神，在我活的地方！相信自己，相信未来。加油
9楼2013-05-14 11:32:24
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cjzyfx

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是这样的话估计跟胚的状态，农杆菌的状态有关系
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迷茫的蚊子
2楼2013-05-13 14:49:39
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liyeer

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 14:49:39
如果是这样的话估计跟胚的状态，农杆菌的状态有关系

打枪的DNA是包含构建好的载体质粒的农杆菌质粒
胚还是2.5mm的胚，第一次也是这样的胚
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3楼2013-05-13 17:21:50
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liyeer

铜虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 17:36:07
首先，质粒就是质粒，没有什么农杆菌，大肠杆菌质粒的
一开始我以为你是用农杆菌侵染的，所以农杆菌状态可排除，每一批胚尽管都是2.5mm的，但是可能它的状态会差别很大，还有染色液，同样的染色液，染不同批次的东 ...

很精辟的回答！！！！！！！！受益匪浅
不好意思，再请教一下：瞬时表达应该做几个平行呢？如果平行之间差异很大，该怎么处理呢？
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5楼2013-05-13 17:57:51
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cjzyfx

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by liyeer at 2013-05-13 17:57:51
很精辟的回答！！！！！！！！受益匪浅
不好意思，再请教一下：瞬时表达应该做几个平行呢？如果平行之间差异很大，该怎么处理呢？...

瞬时表达本身就不靠谱，何不做稳定表达
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迷茫的蚊子
6楼2013-05-13 20:20:15
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liyeer

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-13 20:20:15
瞬时表达本身就不靠谱，何不做稳定表达...

稳定转化同时也在做。稳定表达周期太长，我们实验室是做玉米的。玉米的转化率太低，构建的载体有14个，只有一两个构建能得到转化苗（按经验），而且转化事件不足10个。这样的结果完全不够啊。
我是硕士，就想着如果瞬时表达结果完整的话，就用瞬时的结果毕业
可是瞬时的实验也不顺利……
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7楼2013-05-14 08:39:35
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liyeer

铜虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by cjzyfx at 2013-05-14 09:04:00
瞬时表达是比较快，但是也有它的弊端，要想实验结果准确，最好是做的重复数多些，以降低误差...

恩，非常感谢！！！！！
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10楼2013-05-15 16:56:15
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