应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌DNA提取~
51/1返回列表
查看: 841  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

白话八股

金虫 (正式写手)

[交流] 细菌DNA提取~

自己在提一株细菌的DNA，提出来要去做PCR。
这株菌表面有一层多糖，先用的CTAB法提的，提取了两次，跑电泳几乎没有条带。各位大神帮看下有步骤什么问题，需要怎么改进？O(∩_∩)O谢谢~
操作步骤：
1.将6ml菌液转入10ml离心管中，4000rpm，离心10min，弃上清。
加入500ul TE缓冲液，震荡，使菌体完全溶解，用移液枪将其转入1.5ml PE管中，再加入500ul 溶菌酶溶液（10mg/ml），体系的溶菌酶终浓度为5mg/ml。
37℃保温3h。
2.加入50ul SDS(10%)  37℃保温1h。
3.加入1ml 65℃预热的CTAB溶液和1ml 5M NaCl溶液
将装有CTAB和样品的EP管放入65℃水浴，约1h
4.冷却后，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1=576:24），12000rpm。离心15min
吸上清，装入一新的EP管
5.加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离心15min
6.吸上清，转入一新的离心管中，加入1/3体积的NaAc（3mol/l）
加入1ml-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃（-80℃，30min）1-2h
12000rpm，10min弃上清
7、向离心管中加入1ml 75%的乙醇，12000rpm，10min弃上清，置于吸水纸上倒置晾干
8、加入TE缓冲液（10-20ul）溶解
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-05-03 17:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

力亮

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
革兰氏阳性菌 用一般的提取基因组的试剂盒应该就可以的！CTAB法貌似也可以的   前几天我也刚做了   不过就是实验步骤稍微有一点不一样。最后一步TE溶解我是时间稍微长一些。但愿能帮上楼主。
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-04 10:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

莓林塔

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
白话八股(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-03 23:15:47
gyesang: 回帖置顶 2013-05-03 23:16:42
溶菌酶之前先加玻璃珠涡旋振荡破壁，破壁1min然后冰浴1min，4个循环差不多了~我有次也是，特别黏的菌，就这么出来的，你试试吧~而且37度保温也可以换成摇床啊，充分接触~还有就是加SDS的时候不加点蛋白酶K么？2.5微升就够了应该~
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-03 22:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白话八股

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-05-03 22:25:35
溶菌酶之前先加玻璃珠涡旋振荡破壁，破壁1min然后冰浴1min，4个循环差不多了~我有次也是，特别黏的菌，就这么出来的，你试试吧~而且37度保温也可以换成摇床啊，充分接触~还有就是加SDS的时候不加点蛋白酶K么？2.5微 ...

蛋白酶Ｋ实验室没找到～现在急着做，能不能用中性蛋白酶？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-04 09:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莓林塔

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 白话八股 at 2013-05-04 09:24:13
蛋白酶Ｋ实验室没找到～现在急着做，能不能用中性蛋白酶？...

不知道啊，没用过呢~我也新手一枚~问问你老师呢？？我老师还木有来~~
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-04 10:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291 求调剂 +4 化工2026届毕业� 2026-03-21 4/200 2026-03-23 09:59 by bingchuan
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭