| 查看: 1017 | 回复: 6 | |||
[交流]
细菌DNA提取~
|
|||
|
自己在提一株细菌的DNA，提出来要去做PCR。 这株菌表面有一层多糖，先用的CTAB法提的，提取了两次，跑电泳几乎没有条带。各位大神帮看下有步骤什么问题，需要怎么改进？O(∩_∩)O谢谢~ 操作步骤： 1.将6ml菌液转入10ml离心管中，4000rpm，离心10min，弃上清。 加入500ul TE缓冲液，震荡，使菌体完全溶解，用移液枪将其转入1.5ml PE管中，再加入500ul 溶菌酶溶液（10mg/ml），体系的溶菌酶终浓度为5mg/ml。 37℃保温3h。 2.加入50ul SDS(10%) 37℃保温1h。 3.加入1ml 65℃预热的CTAB溶液和1ml 5M NaCl溶液 将装有CTAB和样品的EP管放入65℃水浴，约1h 4.冷却后，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1=576:24），12000rpm。离心15min 吸上清，装入一新的EP管 5.加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离心15min 6.吸上清，转入一新的离心管中，加入1/3体积的NaAc（3mol/l） 加入1ml-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃（-80℃，30min）1-2h 12000rpm，10min弃上清 7、向离心管中加入1ml 75%的乙醇，12000rpm，10min弃上清，置于吸水纸上倒置晾干 8、加入TE缓冲液（10-20ul）溶解 |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有125人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细菌总DNA提取条带诡异
已经有7人回复
- 用试剂盒提细菌基因组 有个菌提不出来~~求解
已经有5人回复
- 怎样从酸奶里提取乳酸菌DNA呀
已经有9人回复
- 试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。
已经有10人回复
- 细菌RNA提取
已经有14人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 血液中提取细菌DNA
已经有5人回复
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- 细菌RNA的提取
已经有7人回复
- 基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀
已经有13人回复
- CTAB提取细菌DNA
已经有15人回复
- 基因组提取
已经有7人回复
- 【求助/交流】提取的DNA纯度不好
已经有10人回复
- 【求助/交流】DNA的琼脂糖凝胶电泳检测
已经有9人回复
- 【求助/交流】提细菌DNA的同时有没有可能把动物组织DNA提出来呢
已经有10人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教
已经有21人回复
4楼2013-05-03 22:25:35
5楼2013-05-04 09:24:13
6楼2013-05-04 10:17:26
7楼2013-05-04 10:29:57
简单回复
白话八股2楼
2013-05-03 20:50
回复
顶一下~
2013-05-03 21:13
回复
