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[交流]
细菌DNA提取~
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自己在提一株细菌的DNA，提出来要去做PCR。 这株菌表面有一层多糖，先用的CTAB法提的，提取了两次，跑电泳几乎没有条带。各位大神帮看下有步骤什么问题，需要怎么改进？O(∩_∩)O谢谢~ 操作步骤： 1.将6ml菌液转入10ml离心管中，4000rpm，离心10min，弃上清。 加入500ul TE缓冲液，震荡，使菌体完全溶解，用移液枪将其转入1.5ml PE管中，再加入500ul 溶菌酶溶液（10mg/ml），体系的溶菌酶终浓度为5mg/ml。 37℃保温3h。 2.加入50ul SDS(10%) 37℃保温1h。 3.加入1ml 65℃预热的CTAB溶液和1ml 5M NaCl溶液 将装有CTAB和样品的EP管放入65℃水浴，约1h 4.冷却后，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1=576:24），12000rpm。离心15min 吸上清，装入一新的EP管 5.加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离心15min 6.吸上清，转入一新的离心管中，加入1/3体积的NaAc（3mol/l） 加入1ml-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃（-80℃，30min）1-2h 12000rpm，10min弃上清 7、向离心管中加入1ml 75%的乙醇，12000rpm，10min弃上清，置于吸水纸上倒置晾干 8、加入TE缓冲液（10-20ul）溶解 |
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