| 查看: 499 | 回复: 4 | ||
永远不知道至尊木虫 (著名写手)
金花家族创始人
|
[求助]
关于重组蛋白的一些问题
|
|
1.最近在做转化和诱导，现在有一个问题，当目的基因连接到载体上面之后，诱导表达的蛋白质中除了含有目的基因表达的蛋白，是否还有载体表达的蛋白？ 2.如果有的话，那载体表达的蛋白是否和目的基因表达的蛋白连在一起还是分别表达，也就是说表达成两个蛋白？ 3.这个因该如何检测，是否要做一个质谱检测？如果要的话，请高手解释一下质谱的方法。 谢谢各位 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于蛋白质的鉴定定量什么之类的问题~((T_T))~
已经有10人回复
- 重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达策略
已经有6人回复
- Chem. Soc. Rev最新综述-杨志谋：重组蛋白交联水凝胶(附相关Science 2篇)
已经有92人回复
- 重组蛋白是包涵体怎么溶
已经有42人回复
- 重组蛋白含半胱氨酸纯化过程如何保护巯基
已经有14人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 怎样把strep标签加到重组蛋白的C端
已经有3人回复
- 组氨酸标签重组蛋白纯化
已经有10人回复
- 重组蛋白前面会不会有其他的氨基酸残基
已经有11人回复
- 重组蛋白结合不到ni柱上
已经有24人回复
- 关于蛋白重组表达的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于GFP融合的蛋白的一些问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】重组蛋白是红色的，怪事！
已经有22人回复
 |
2楼2013-04-27 14:19:44
hy1050439829
金虫 (正式写手)
- 应助: 32 (小学生)
- 贵宾: 0.018
- 金币: 1870.1
- 散金: 41
- 红花: 3
- 帖子: 676
- 在线: 192.3小时
- 虫号: 1763585
- 注册: 2012-04-18
- 性别: GG
- 专业: 激光
3楼2013-04-27 14:25:55
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 15:12:24
永远不知道: 金币+20, ★★★很有帮助, 要是再详细点就好了 2013-04-27 15:49:36
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 15:12:24
永远不知道: 金币+20, ★★★很有帮助, 要是再详细点就好了 2013-04-27 15:49:36
|
1. 理论上说，诱导的是表达载体上的特定启动子。一般的表达载体在多克隆位点上游是启动子，后面一般有终止子，所以终止子后面的序列不会受到诱导启动子的影响。当然，即使没有强启动子的作用，载体仍然可能表达一下蛋白，比方说抗性基因。所以，严格的说，做诱导最好能用空载体作为对照。 2. 不可能是连在一起的吧。你克隆基因是包括起始密码子和终止密码子的。即使没有终止子，也不可能是一个蛋白。融合蛋白需要把前面基因的终止密码子去掉。 3. 一般是先做诱导，跑SDS-PAGE. 如果能在目标蛋白分子量附近有明显诱导的蛋白，就可以初步确定。一般表达载体可能带有affinity tag，可以用tag的抗体做western。或者你有目标蛋白的特异性抗体，也可以检测。当然，打质谱也是可以鉴定的。如果你能纯化到蛋白，可以先做纯化，然后跑胶，挖带，trypsin消化成肽段。如果你有质谱，可以自己打质谱，否则可以送公司做。 |
4楼2013-04-27 14:33:16
永远不知道
至尊木虫 (著名写手)
金花家族创始人
- 应助: 62 (初中生)
- 贵宾: 0.679
- 金币: 13596.2
- 散金: 2392
- 红花: 54
- 沙发: 5
- 帖子: 2660
- 在线: 524.5小时
- 虫号: 1196885
- 注册: 2011-01-27
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
这是我瞎填着玩的 5楼2013-04-27 15:43:42
10