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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！群落PCR，忘记加taq酶，可以在原来的体系中补上taq酶重新PCR么？
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莓林塔

木虫 (小有名气)

[求助] 求助！群落PCR，忘记加taq酶，可以在原来的体系中补上taq酶重新PCR么？

如题，愚蠢的错误，群落PCR，忘记加taq酶，因为数量比较庞大不想重新做，想知道可不可以在PCR过一次的体系中补加酶重新PCR？计划早上取两个体系补上taq酶重新P一次，因为之前加了buffer应该对DNA链起到了保护作用应该还是链吧？经过了很多次高温DNA应该已经破壁出来了，想知道在第一次高温变性之前的DNA变性时间要不要缩短一些？或者这样做是不是根本就是不可行的？求高手解答啊！！很烦躁啊很烦躁！！
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1楼 2013-04-27 00:03:56
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莓林塔

木虫 (小有名气)
其实我主要就是想问预变性的时间要不要短一些啊？？？？？？我们正常是要10分钟的，啊啊啊啊啊！！
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2楼2013-04-27 00:14:28
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-27 08:32:21
莓林塔: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 第一个回帖的！我补了酶重新做了，都OK！ 2013-04-28 23:23:58
可以直接补加taq就可以了！其他的东西应该都是比较稳定的，如果可以可以适当加一半量的dNTP.
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3楼2013-04-27 00:28:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莓林塔: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 第二个回帖的！我补了酶重新做了，都OK！ 2013-04-28 23:24:09
应该可以直接加酶的。不过，如果如果你有很多样品，分别加酶比用master mix酶的用量要高出数倍。预变性时间可以按照普通PCR程序设置。
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4楼2013-04-27 08:32:25
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mamjun

金虫 (小有名气)
不好加吧，算下来一管子只加很少的酶，这下可练手了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-05-02 23:01:23
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莓林塔

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mamjun at 2013-05-02 23:01:23
不好加吧，算下来一管子只加很少的酶，这下可练手了

小事了，我右手加样加的洗脸遇到水的阻力都疼，一天跑个百八十的孔的胶都小事小事

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-05-02 23:33:10
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露露琦琦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-04-27 00:14:28
其实我主要就是想问预变性的时间要不要短一些啊？？？？？？我们正常是要10分钟的，啊啊啊啊啊！！

预变性3min也可以了
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7楼2015-06-16 10:24:44
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