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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR配体系的时候taq酶为什么要最后加入
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liuchenammk

铜虫 (初入文坛)

[求助] PCR配体系的时候taq酶为什么要最后加入

请问，配PCR体系的时候taq酶为什要最后加入啊？请高手指教，谢谢
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1楼 2012-03-24 12:53:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

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个人经验：
    1. 体系都是从大到小加，方便吸取，酶用量往往是最少的，所以最后加
    2. 酶活对温度有敏感性，所以我们都是配好了别的成分，最后从冰箱取酶出来放到冰盒上添加
    3. 如果是做手工HotStart，那酶更应该最后加了。
    希望有所帮助
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Let God do with it as He wills
2楼2012-03-24 13:25:10
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jinhx87

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
添加Taq酶之前，于95度变性十分钟，若这时体系当中有Taq酶，虽说Taq酶耐高温，但对它的酶活有一定影响的。
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3楼2012-03-24 14:06:11
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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虽然Taq酶最适反应温度很高，但是低温时有模板引物在条件适宜也会扩增，最后加马上进行反应可以有效防止非特异性扩增。
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生活是面镜子~
4楼2012-03-25 00:26:28
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