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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做miRNA定量PCR之前的反转录
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

[求助] 做miRNA定量PCR之前的反转录 已有2人参与

最近准备做定量PCR检测不同组织miRNA的表达量差异，RNA已提取好，反转录不知道该怎么做了，听说miRNA要设计特别的反转录引物，叫什么颈环引物，具体是怎么回事，请知道的大侠不吝赐教啊！最好是有miRNA反转录的详细操作步骤，以及引物设计的方法
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1楼 2013-04-25 21:55:24
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果想特异性高一点，就自己设计茎环法定引物，可能需要优化；也可以买试剂盒，一般采用3‘加polyA 尾巴的方法，一次可以反转录好多目的片段。看你具体的实验设计和实验室条件了，百度上都能搜索到具体的方法。
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8楼2015-11-19 13:06:30
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meigaofu

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1<br>你是我的幸福: 金币+1, <font color=red>★</font>有帮助 <font color="gray">2013-04-30 08:19:20</font>
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 20:59:57
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-28 19:27:55
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froess

新虫 (初入文坛)
★ ★
你是我的幸福(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 21:00:15
gyesang: 回帖置顶 2013-05-01 21:02:25
茎环引物是特异针对miRNA设计的引物，由于miRNA长度很短，往往引物长度都大于它本身，不利于引物结合。茎环引物是环状的，其中有6~8nt与miRNA互补，这样可以连接并增长，如果你还不明白，可以搜相关文献看看，然后建议找公司直接合成，很多公司都有miRNA反转录试剂盒并能提供引物设计服务呢，我就是直接找公司做的
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3楼2013-05-01 20:57:04
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henka

新虫 (初入文坛)
mRNA应该尝试takara的，的确不错，不过他们是我们竞争对手，所以我不会把资料给你的。
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4楼2013-05-01 22:17:23
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