应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 芽孢杆菌敲除问题
141/2返回列表12下一页
查看: 2074  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 芽孢杆菌敲除问题

本人想做萎缩芽孢杆菌的基因筛选，想用新霉素做抗性筛选，现在手里有一个带有新霉素基因的质粒，但是不知道如何把该基因扩下来，是要扩多长可以做抗性筛选，要把启动子也扩出来吗？诚心求助大牛指教！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-22 16:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wuguang2013

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-05-15 13:46:51
做基因敲除的方法很多，最常见的就是转座子敲除，但是我最近在做双交换敲除法，用到两个文献，一个是关于自杀性质粒，一个是双交换敲除原理的，你可以试着看看。希望对你有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
乐天派广！牙齿天天晒太阳！！！
2楼2013-04-22 20:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by zd0017 at 2013-04-23 15:43:59
弱弱的问下楼上所说的Bt是那种菌，那如果做突变用到抗性筛选的话，如何获得抗性基因呢...

抗性基因的启动子一般是抗生素诱导的，一般都会表达的，基本不用担心不会表达。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-04-24 12:03:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清水一杯

新虫 (初入文坛)
★ ★
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫应助！ 2013-05-15 13:47:16
还得确定一下该新霉素基因是原本是用于原核生物还是真核生物的。二者的密码子并不一样。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2013-04-25 17:28:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhangxingc: 金币+3, 鼓励热心回帖应助 2013-04-28 10:11:29
引用回帖:
10楼: Originally posted by zd0017 at 2013-04-25 19:09:42
这个新霉素基因是从真核表达载体上扩下来的，难道不能用？？？有点不明白的是为什么载体上把这个抗性基因写成kanR/neoR是什么意思？难道是这两个抗性基因是序列相同吗？？...

一种编码氨基糖苷磷酸转移酶的基因，该酶可是这两种抗生素磷酸化，从而干扰它们向细胞内主动转移以达到抗卡那霉素和新霉素的作用。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2013-04-27 19:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuguang2013 at 2013-04-22 20:49:37
做基因敲除的方法很多，最常见的就是转座子敲除，但是我最近在做双交换敲除法，用到两个文献，一个是关于自杀性质粒，一个是双交换敲除原理的，你可以试着看看。希望对你有帮助！

谢谢你啊，能否把这两篇文献发给我一下！！
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 10:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你知道质粒的序列吗？如果知道就方便了，要把新霉素基因自身的所有序列都扩出来，包括上游的启动子序列（尽量往前都扩点）和后下游的终止序列（尽量往后多扩点）。我就是采用这样的策略从pET-28a中扩的卡纳抗性基因的，希望对你有用。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-23 11:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dmzha at 2013-04-23 11:33:15
你知道质粒的序列吗？如果知道就方便了，要把新霉素基因自身的所有序列都扩出来，包括上游的启动子序列（尽量往前都扩点）和后下游的终止序列（尽量往后多扩点）。我就是采用这样的策略从pET-28a中扩的卡纳抗性基因 ...

嗯，知道质粒序列的，就是不确定是否要扩启动子序列什么的，了解啦，谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-23 13:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenfanren

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangxingc: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助，欢迎常到微生物版 2013-04-28 10:11:04
基因不能随便扩，就算扩了启动子，也未必可以在Bt里表达，这个基因最好是Bt里的，或是已经在BT里成功表达过了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-23 14:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhenfanren at 2013-04-23 14:55:36
基因不能随便扩，就算扩了启动子，也未必可以在Bt里表达，这个基因最好是Bt里的，或是已经在BT里成功表达过了。

弱弱的问下楼上所说的Bt是那种菌，那如果做突变用到抗性筛选的话，如何获得抗性基因呢
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-23 15:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 清水一杯 at 2013-04-25 17:28:38
还得确定一下该新霉素基因是原本是用于原核生物还是真核生物的。二者的密码子并不一样。

这个新霉素基因是从真核表达载体上扩下来的，难道不能用？？？有点不明白的是为什么载体上把这个抗性基因写成kanR/neoR是什么意思？难道是这两个抗性基因是序列相同吗？？
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-25 19:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zd0017 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭