应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 芽孢杆菌敲除问题
52/1返回列表
查看: 2160  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 芽孢杆菌敲除问题

本人想做萎缩芽孢杆菌的基因筛选，想用新霉素做抗性筛选，现在手里有一个带有新霉素基因的质粒，但是不知道如何把该基因扩下来，是要扩多长可以做抗性筛选，要把启动子也扩出来吗？诚心求助大牛指教！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-04-22 16:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhangxingc: 金币+3, 鼓励热心回帖应助 2013-04-28 10:11:29
引用回帖:
10楼: Originally posted by zd0017 at 2013-04-25 19:09:42
这个新霉素基因是从真核表达载体上扩下来的，难道不能用？？？有点不明白的是为什么载体上把这个抗性基因写成kanR/neoR是什么意思？难道是这两个抗性基因是序列相同吗？？...

一种编码氨基糖苷磷酸转移酶的基因，该酶可是这两种抗生素磷酸化，从而干扰它们向细胞内主动转移以达到抗卡那霉素和新霉素的作用。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2013-04-27 19:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

wuguang2013

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-05-15 13:46:51
做基因敲除的方法很多，最常见的就是转座子敲除，但是我最近在做双交换敲除法，用到两个文献，一个是关于自杀性质粒，一个是双交换敲除原理的，你可以试着看看。希望对你有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
乐天派广！牙齿天天晒太阳！！！
2楼2013-04-22 20:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuguang2013 at 2013-04-22 20:49:37
做基因敲除的方法很多，最常见的就是转座子敲除，但是我最近在做双交换敲除法，用到两个文献，一个是关于自杀性质粒，一个是双交换敲除原理的，你可以试着看看。希望对你有帮助！

谢谢你啊，能否把这两篇文献发给我一下！！
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 10:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你知道质粒的序列吗？如果知道就方便了，要把新霉素基因自身的所有序列都扩出来，包括上游的启动子序列（尽量往前都扩点）和后下游的终止序列（尽量往后多扩点）。我就是采用这样的策略从pET-28a中扩的卡纳抗性基因的，希望对你有用。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-23 11:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 16:51 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 15:48 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-16 15:24 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 07:48 by i0IGWqQuchto
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-16 07:12 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 07:03 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:36 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:03 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭