| 查看: 3428 | 回复: 7 | ||
[求助]
DEAE-纤维素的洗脱及再生
|
| 最近使用纤维素52出现了问题 就是上柱之后洗脱的时候波峰变化不大 颜色分布不均匀 感觉洗脱不下来 打算重新上柱 可是柱子的再生处理不知道如何进行 能不能帮忙解答一下 谢谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
273农学求调剂
已经有0人回复
-
一志愿上海海洋大学083200,303分求调剂
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有177人回复
-
食品科学调剂交流
已经有0人回复
-
食品学硕362求调剂
已经有3人回复
-
一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业
已经有7人回复
-
食品调剂08考数学可调
已经有0人回复
-
食品工程调剂
已经有2人回复
-
09，食品与营养272求调剂
已经有0人回复
-
一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业083200
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DEAE-52洗脱液离子强度与产物之间的关系
已经有5人回复
- DEAE-纤维素阴离子交换树脂纯化多糖，柱子重生
已经有8人回复
- DEAE-纤维素的预处理方式
已经有10人回复
- 多糖用活性炭脱色的问题
已经有14人回复
- DEAE-52纤维素柱求助
已经有22人回复
- 多糖分离纯化 急
已经有4人回复
- 抗血清的纯化方法
已经有10人回复
- DEAE-纤维素52用NaCl冲洗，为什莫会冲下大量黄色液体？？
已经有6人回复
- 怎样判断DEAE-纤维素柱上样超载？急求！！
已经有8人回复
- DEAE-纤维素分离多糖时若盐浓度高于糖能否通过稀释来富集多糖？
已经有15人回复
- DEAE-52纤维素能否用DEAE Sepharose fast flow替换使用呢？
已经有7人回复
- 求助离子交换柱的选择？
已经有8人回复
- 怎么样选择层析柱、DEAE纤维素型号
已经有7人回复
- 离子交换层析（deae-纤维素）出峰差异很大（有图谱）
已经有26人回复
- DEAE纤维素的柱体积怎么计算
已经有3人回复
- 羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别？
已经有4人回复
- 蛋白过纤维素柱的过程
已经有3人回复
- 使用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化蛋白后杂蛋白的洗脱
已经有7人回复
- DEAE-cellulose 52 纯化多糖
已经有15人回复
- DEAE分离多糖时Nacl梯度洗脱的浓度如何确定
已经有5人回复
- 【求助】有关DEAE装柱问题
已经有7人回复
- DEAE纤维素装柱时流速超慢，怎么办
已经有13人回复
user59888
金虫 (文坛精英)
宫创始人 ------小妮
- 食品EPI: 15
- 应助: 461 (硕士)
- 贵宾: 0.463
- 金币: 1221.8
- 散金: 38093
- 红花: 1140
- 沙发: 950
- 帖子: 40334
- 在线: 1737.1小时
- 虫号: 1737174
- 注册: 2012-04-05
- 专业: 食品加工技术
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
我有以下建议: 建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。 建议二：你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。 建议三：多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。 建议四：梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。 建议四：你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。 0.1％叠氮钠缓冲液的叠氮钠缓冲液，中的缓冲液一般缓冲液均可，一般用层析时的初始缓冲液，我们用的是0.0M 的Tris-HCl从未出现过问题。已用此方法保存了柱子一年，其间一直在使用。 柱子再生的方法有两类，1.是将整个柱子洗下来，然后再表面活性剂，NaCl，酸碱处理，这种处理方法比较费时，当然也比较彻底，现在这种方法用的比较少，除非柱子污染比较严重；现在通常的方法是2.在柱子用后直接处理，常用的洗涤液中可含有：NaCl、6M或8M 脲、有机溶剂（如醇类等）、表面活性剂等。 我给你的第二种方法应该是一种比较强的再生洗涤液，这个方法也是我最近查文献查的，因为我近来的这个实验中发现高盐洗涤不彻底，所以查到了这个方法，洗涤后要用大量的水将其中的表面活性剂去除，然后再用上柱起始缓冲液平衡。 |
2楼2013-04-19 17:55:31
3楼2013-04-20 08:41:18
4楼2013-04-20 23:21:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
lanlanbetty: 金币+4, ★有帮助 2013-04-21 20:31:24
lanlanbetty: 金币+4, ★有帮助 2013-04-21 20:31:24
| 对了还有填料的再生问题，你按照填料的说明书的要求，一般流程是这样的：柱平衡，进样，洗脱，每次洗脱结束的时候你要用你的洗脱液的高盐溶液冲洗3~4个柱体积，然后再用纯水冲洗以代替柱子里面存在的高盐，然后再做层析钱再一次地柱平衡，如此循环~~~当你发现做了好几次后测得的峰分离的不明显，你是否考虑一下你的填料是否有问题，因为填料保存不当的话会被微生物污染的，你问一下填料的气味正常不正常~~~我当时做的时候那个填料是臭的 我师兄没说，害的我白做了大半个月的时间 ~~ |
5楼2013-04-20 23:24:42
6楼2013-04-21 20:29:02
7楼2018-10-09 09:39:36
|
本帖内容被屏蔽 |
8楼2022-06-30 15:06:36
