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cuicchao金虫 (正式写手)
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毕赤酵母用于电转化制备感受态细胞步骤
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毕赤酵母电转化： 介绍：该方法无需产生去壁细胞，是产生毕赤酵母重组子的简便方法。与去壁细胞效率 相似。 细胞准备： 1 在含5mlYPD 的50ml 离心管中，培养毕赤酵母，30 度过夜 2 取0.1-0.5ml 过夜培养物，接种含500ml 新鲜培养基的2L 摇瓶，过夜生长至OD600 ＝1.3-1.5 3 在4 度，1500g离心5min收集细胞,用500ml预冷的灭菌水悬浮细胞 4 如上离心，用250 ml预冷的灭菌水悬浮细胞 5 如上离心，用20ml预冷的1M山梨醇悬浮细胞 6 如上离心，用1 ml 预冷的1M山梨醇悬浮细胞，至终体积约1.5ml 注意：可冻存80ul 等量的电感受态细胞，但转化效率会降低很多 有谁能告诉我这步骤里面灭菌水，山梨醇处理细胞毕赤酵母细胞的原理是什么啊？ |
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 分子生化实验经验积累 | 基因克隆与表达 |
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cuicchao
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低渗透是使细胞更脆吧，容易电击穿? 
9楼2013-04-15 22:46:47
3楼2013-04-15 10:28:25
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