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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母用于电转化制备感受态细胞步骤
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cuicchao

金虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母用于电转化制备感受态细胞步骤

毕赤酵母电转化：
介绍：该方法无需产生去壁细胞，是产生毕赤酵母重组子的简便方法。与去壁细胞效率
相似。
细胞准备：
1 在含5mlYPD 的50ml 离心管中，培养毕赤酵母，30 度过夜
2 取0.1-0.5ml 过夜培养物，接种含500ml 新鲜培养基的2L 摇瓶，过夜生长至OD600
＝1.3-1.5
3 在4 度，1500g离心5min收集细胞,用500ml预冷的灭菌水悬浮细胞
4 如上离心，用250 ml预冷的灭菌水悬浮细胞
5 如上离心，用20ml预冷的1M山梨醇悬浮细胞
6 如上离心，用1 ml 预冷的1M山梨醇悬浮细胞，至终体积约1.5ml
注意：可冻存80ul 等量的电感受态细胞，但转化效率会降低很多

有谁能告诉我这步骤里面灭菌水，山梨醇处理细胞毕赤酵母细胞的原理是什么啊？
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好心态；年轻派
1楼 2013-04-15 09:26:06
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cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2013-04-15 10:28:25
灭菌水是起到去离子低渗透的作用，山梨醇是保护细胞的作用

低渗透是使细胞更脆吧，容易电击穿?
赞一下 回复此楼
好心态；年轻派
9楼2013-04-15 22:46:47
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)
★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:33:37
灭菌水是起到去离子低渗透的作用，山梨醇是保护细胞的作用
赞一下 回复此楼
加油
3楼2013-04-15 10:28:25
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爱上文慧

银虫 (小有名气)
★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:33:47
去离子水就是洗涤细胞的作用啊，把培养基洗掉。
做好的感受态比较脆弱，而且电击的过程会使细胞穿孔，所以加山梨醇是提供稳定的渗透压，为了保护细胞的。
赞一下 回复此楼
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
4楼2013-04-15 11:27:53
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liyuanming

铜虫 (初入文坛)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
请问各位大牛GS115分离纯化时候含HIS的补充培养基在YNB里加多少组氨酸？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-15 11:30:10
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查看全部 14 个回答
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