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cuicchao

金虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母用于电转化制备感受态细胞步骤

毕赤酵母电转化:
介绍:该方法无需产生去壁细胞,是产生毕赤酵母重组子的简便方法。与去壁细胞效率
相似。
细胞准备:
1 在含5mlYPD 的50ml 离心管中,培养毕赤酵母,30 度过夜
2 取0.1-0.5ml 过夜培养物,接种含500ml 新鲜培养基的2L 摇瓶,过夜生长至OD600
=1.3-1.5
3 在4 度,1500g离心5min收集细胞,用500ml预冷的灭菌水悬浮细胞
4 如上离心,用250 ml预冷的灭菌水悬浮细胞
5 如上离心,用20ml预冷的1M山梨醇悬浮细胞
6 如上离心,用1 ml 预冷的1M山梨醇悬浮细胞,至终体积约1.5ml
注意:可冻存80ul 等量的电感受态细胞,但转化效率会降低很多

有谁能告诉我这步骤里面灭菌水,山梨醇处理细胞毕赤酵母细胞的原理是什么啊?
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好心态;年轻派
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:33:37
灭菌水是起到去离子低渗透的作用,山梨醇是保护细胞的作用
加油
3楼2013-04-15 10:28:25
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爱上文慧

银虫 (小有名气)

★ ★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
cuicchao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:33:47
去离子水就是洗涤细胞的作用啊,把培养基洗掉。
做好的感受态比较脆弱,而且电击的过程会使细胞穿孔,所以加山梨醇是提供稳定的渗透压,为了保护细胞的。
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
4楼2013-04-15 11:27:53
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liyuanming

铜虫 (初入文坛)


cuicchao(金币+1): 谢谢参与
请问各位大牛GS115分离纯化时候含HIS的补充培养基在YNB里加多少组氨酸?谢谢
5楼2013-04-15 11:30:10
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主


cuicchao(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~~
欢迎来课件资源http://emuch.net/bbs/forumdisplay.php?fid=112
6楼2013-04-15 12:28:28
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