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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求心肌组织总蛋白提取注意事项
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nick.nye-0313

铜虫 (小有名气)

[求助] 求心肌组织总蛋白提取注意事项

求心肌组织总蛋白提取注意事项，我们用凯基的全蛋白提取盒，使用液氮研碎心肌组织，后加入裂解液，用细胞破碎仪超声（冰水上操作），离心取上清。我想问有么有人用同样的方法提取总蛋白，有的话能否介绍一下经验。超声多久，功率多大，如何超声才能使细胞破碎的好且又 不至于使蛋白变性。我取心肌组织30mg，加入250ulLysis buffer, 我每次超一下(超半秒)，一组样本轮回超3轮，然后10000转离心5分钟取上清。可是做acting发现不齐。是定量的问题还是，蛋白没提出来？希望大虾指教！！！不胜感激！
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只为成功找方法
1楼 2013-04-13 23:37:06
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wangkj

荣誉版主 (文坛精英)

Qing Feng

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正在竭力帮忙查找和解决 可以在等等
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上善若水
2楼2013-04-13 23:54:05
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leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们提取细胞总蛋白是冰水混合物中超声至透明（即肉眼观察不到细胞组织碎片），超声操作为超声不超过十秒，然后停十秒以上再超，离心后提取的上清需要测定蛋白质含量后再做蛋白印迹
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3楼2013-04-15 17:51:57
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