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cyt198木虫 (小有名气)
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[求助]
westernblot发光液
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| 想问一下westernblot常用的发光液种类以及它们的优缺点和价格，麻烦专业人员给推荐一下，我最近想选择一款，谢谢！ |
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缩++影: 编辑内容 2013-11-08 17:40
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4楼2013-07-02 22:12:25
xiangyu9356
至尊木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-04-10 16:53:45
cyt198: 金币+50, ★★★很有帮助 2013-04-11 15:59:51
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cyt198: 金币+50, ★★★很有帮助 2013-04-11 15:59:51
| 我们实验室一直在用Millipore发光液，我也曾经和别的发光液比较过，感觉还是Millipore的稍微好一些，发光效率和稳定性都不错。就是价格稍贵，500ml装￥2000+，100ml装￥650+。 |
2楼2013-04-10 11:31:29
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在Western Blotting实验的发光检测中，由于发光增强剂的使用，发光灵敏度已不是问题，更核心和关键的是，避免发光试剂造成“非特异条带”或“背景条带”、避免“发光淬灭”，需要发光更加稳定可靠，避免人为干扰。发光检测试剂的发光特异性和发光稳定性已成为实验成功的关键。 EnlightTM Western特异发光检测试剂有如下特点： 1. EnlightTM采用精准的发光底物，有效降低发光试剂造成的非特异发光和背景发光。 2. EnlightTM含独特的发光增强剂，灵敏度高，微弱的信号也能检测。 3. EnlightTM采用特异的发光配方，发光快速而稳定。 4. EnlightTM不破坏膜上蛋白，可在曝光后，经洗涤，对多种蛋白进行杂交。 1. 常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。 注意：EnlightTM推荐的抗体稀释度为: 储存液浓度为1mg/ml的一抗推荐稀释度 储存液浓度为1mg/ml的二抗推荐稀释度 1:1000-1:5000 或 0.2-1.0μg/ml 1:2000-1:10000或10-50μg/ml 2. 新鲜配制发光工作液。将BufferA和Buffer B按1:1比率混合，制成发光工作液(每1cm2膜需要0.125ml发光工作液)。转移到清洁的塑料小盒中。 3. 用镊子将漂洗过的膜取出，将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的洗液，但勿使膜完全干燥。将膜转移至有发光工作液的塑料小盒中，使其完全浸泡，轻轻摇晃，室温孵育几十秒到1分钟。 4. 用镊子将膜夹起5-10秒，并将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液，迅速将膜完全包裹于洁净保鲜膜内，去除气泡和褶皱，蛋白面朝上固定于X片暗盒内。 5. 在黑暗中一次重叠放入3张X光胶片，30分钟或更长时间后全部取出显影。 6. 对同一张膜进行多次蛋白杂交：用PBST或TBST洗涤掉发光液（10min×3次），然后从开始一抗杂交即可。 四 注意事项 1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久，请避光保存，在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果，优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 避免使用NaN3回收HRP偶联的抗体，因为NaN3能抑制HRP的活性。 英格恩的发光液最好用 |
5楼2015-09-08 14:11:27
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