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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？

基因与载体PET-28a连接转化后涂板长出了菌，挑单克隆后摇试管提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？是连接失败还是怎么回事？连接失败的原因是什么呢？
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1楼 2013-04-07 10:56:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:31:51
转化时最好做正负对照，保证抗性板、感受态都没有问题。先做下菌落PCR筛选一下也是不错的选择。此外，PET-28a的拷贝数不如一般克隆质粒高，提质粒的浓度会比较稀。
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9楼2013-04-08 00:58:25
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shangming

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。生物版块欢迎你的无私奉献。 2013-04-07 11:53:02
用的是amp抗性的话，培养12h左右长出来的才是抗性菌落，时间再长amp抗性就失效了，然后就会长出很多卫星菌落，这些卫星菌落基本上不含质粒，所以你在抗性培养基中培养长不出来。
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2楼2013-04-07 11:12:34
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留小保

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能连接失败有可能是提取质粒出问题
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人生若只如初见 何事秋风悲画扇
3楼2013-04-07 11:22:31
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★
我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:31:13
ls回答前至少看一下吧 pet28a的抗性是kan  没卫星菌落的
LZ可以的话先做个colony pcr预筛选下。
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4楼2013-04-07 11:23:00
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