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twisty

木虫 (正式写手)

newer

[求助] native-PAGE

跑酶的活性电泳，用特异底物染色后，发现泳道的三分之二部分都有酶活，产生这种现象的原因是什么？

[ 来自科研家族 化学生物学 ]
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兼并碱基M=A/CR=A/GW=A/TS=G/CY=C/TK=G/TV=A/G/C&n...
1楼 2013-04-04 12:58:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物期待你的精彩。 2013-04-05 12:56:44
native-PAGE没跑好吧。这种活性染色一般是染出条带的。
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2楼2013-04-04 13:43:35
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果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)

三沙市名誉常务副市长

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个有专门的书籍哦 你可以到图书馆借来先学习下
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我的微信号happyjk5208，谢绝闲聊
3楼2013-04-04 14:41:16
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励应助，分子生物期待你的精彩。 2013-04-05 12:57:14
查一下你的酶的等电点,看看适合用什么胶(酸性胶还是碱性胶).还要看看你的蛋白是不是真的进入胶里面了,因为native gel和SDS胶在mobility上没有可比性.估计你看到的全是background,胶上有'污染"的酶
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4楼2013-04-05 02:26:31
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twisty

木虫 (正式写手)

newer
引用回帖:
4楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-05 02:26:31
查一下你的酶的等电点,看看适合用什么胶(酸性胶还是碱性胶).还要看看你的蛋白是不是真的进入胶里面了,因为native gel和SDS胶在mobility上没有可比性.估计你看到的全是background,胶上有'污染"的酶

如果背景胶上有污染的酶，那么两泳道间为何被底物染了色，而泳道却消耗了底物呢？
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兼并碱基M=A/CR=A/GW=A/TS=G/CY=C/TK=G/TV=A/G/C&n...
5楼2013-04-05 08:02:35
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
twisty(gyesang代发): 金币+1, 鼓励交流！ 2013-05-31 23:01:33
凝胶制作有问题，估计是样品漏出。
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6楼2013-04-05 08:34:00
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auroraA

铁虫 (初入文坛)
★ ★
twisty(gyesang代发): 金币+2, 鼓励交流！ 2013-04-28 02:59:55
引用回帖:
5楼: Originally posted by twisty at 2013-04-05 08:02:35
如果背景胶上有污染的酶，那么两泳道间为何被底物染了色，而泳道却消耗了底物呢？...

开始还以为整个胶上都有反应呢.
这个现象不好讲,一个可能的原因是染料stuck到胶里,没洗掉或者根本就不容易洗掉,而lane内部,由于蛋白量很高,而且各种大小,等电点的蛋白都有,所以染料反而进不去,于是就显得弱一些.
建议你可以在跑完胶后,拿出1个lane做western, 然后找你的蛋白在胶上的位置.如果你的western不是single band,而是整条lane的smear,也能解释你看到的现象
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7楼2013-04-05 09:00:52
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twisty

木虫 (正式写手)

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引用回帖:
7楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-05 09:00:52
开始还以为整个胶上都有反应呢.
这个现象不好讲,一个可能的原因是染料stuck到胶里,没洗掉或者根本就不容易洗掉,而lane内部,由于蛋白量很高,而且各种大小,等电点的蛋白都有,所以染料反而进不去,于是就显得弱一些.
...

蛋白量含量不高
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兼并碱基M=A/CR=A/GW=A/TS=G/CY=C/TK=G/TV=A/G/C&n...
8楼2013-04-05 09:23:29
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