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蛋白质包涵体复性收率如何计算？
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蛋白质包涵体复性收率要怎么计算？看了一些文献，但是文献中写的都不具体，望虫友们指点。 好像有两种计算方法，一种是以蛋白质量收率算的复性收率，一种是以活性收率算的复性收率，是吗？ 第一种的计算方法呢？是 （复性液中总蛋白浓度*复性液体积*目标蛋白占复性液中的百分比）/(变性液中总蛋白浓度*变性液体积*目标蛋白占变性液中的百分比) 呢？还是（复性液中总蛋白浓度*复性液体积*目标蛋白占复性液中的百分比）/(变性液中总蛋白浓度*变性液体积) 呢？ 还是（复性液中总蛋白浓度*复性液体积*目标蛋白占复性液中的百分比）/包涵体克数 呢？ 第二种的计算方法呢？ 好像都是说拿标准曲作对照，算复性收率，那具体是怎么计算的呢？ 标准曲是纯的蛋白呀，而复性液中不是纯蛋白，活性又是如何比的呢？ 难道是 比如1mg的总复性液总蛋白的活性/1mg标准品的活性吗？。。。 谢谢。 |
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2楼2013-04-02 22:58:43
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wizardfan: 金币+5, 鼓励新虫发帖，尤其是应助 2013-04-03 08:28:00
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第一种应该是说inclusion body里面你要的蛋白的含量,在你提纯或溶出来之后拿到多少.后者的数比前者的数就是收率.我要是你就拿比如说1%的溶出来的蛋白和1%的没处理过的inclusion body跑胶,比一下band的强度就行了. 第二种可能是要测活性了,因为蛋白变形再复性之后,很多分子虽然在那,但其实是没有活性的.所以要先知道标准品的活性,比如说10u/mg,inclusion body中总共有10mg,那理论活性就是100u.但是你纯化出来的之后总共只有20u(这个数字是算出来的,比如取1%测,测得的活性就X100),那活性收率就是20%. 仅供参考,非专业人士 |
3楼2013-04-03 06:55:11