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koko8001

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助已知mRNA序列及蛋白序列，如何获得蛋白

求助各位，最近在植物上找到一个感兴趣的蛋白，想要获得该蛋白来进行下一步研究，已经查到了蛋白的序列以及mRNA的序列，如何获得该蛋白？望步骤详细些，本人是新手
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1楼2013-03-31 10:40:24
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
koko8001(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-02 21:53:05
到基因文库把完整的蛋白质基因调出来，然后获取该蛋白质的基因，导入载体，导入工程细胞，筛取阳性克隆，大量表达，收获产物，分析结构功能等。在转录水平，转录后水平，翻译水平，翻译后水平，蛋白质的结构功能相互作用等若干角度都可以都可以研究。
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2楼2013-04-20 14:35:54
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

内容太多，要具体讨论，你必须说明你的实验的具体关注点在哪？
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3楼2013-04-20 14:36:53
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vincehmw

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
koko8001(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-02 21:53:18
gyesang: 回帖置顶 2013-05-04 01:49:01
1.先确定在植物哪个组织中表达该蛋白；
2.在对应组织中（比如叶片）提取总RNA;
3.反转录成cDNA(可用反转录试剂盒）；
4.设计引物（该蛋白mRNA序列的开放阅读框上游和下游区）包含构建载体的酶切位点；
5.PCR；
6.PCR产物回收并测序；
7.正确测序结果的片段构建至表达载体；
8.构建好的质粒转化至大肠杆菌，表达成蛋白
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4楼2013-05-02 21:44:25
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