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koko8001

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助已知mRNA序列及蛋白序列,如何获得蛋白

求助各位,最近在植物上找到一个感兴趣的蛋白,想要获得该蛋白来进行下一步研究,已经查到了蛋白的序列以及mRNA的序列,如何获得该蛋白?望步骤详细些,本人是新手
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


koko8001(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 21:53:05
到基因文库把完整的蛋白质基因调出来,然后获取该蛋白质的基因,导入载体,导入工程细胞,筛取阳性克隆,大量表达,收获产物,分析结构功能等。在转录水平,转录后水平,翻译水平,翻译后水平,蛋白质的结构功能相互作用等若干角度都可以都可以研究。
2楼2013-04-20 14:35:54
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

内容太多,要具体讨论,你必须说明你的实验的具体关注点在哪?
3楼2013-04-20 14:36:53
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vincehmw

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
koko8001(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 21:53:18
gyesang: 回帖置顶 2013-05-04 01:49:01
1.先确定在植物哪个组织中表达该蛋白;
2.在对应组织中(比如叶片)提取总RNA;
3.反转录成cDNA(可用反转录试剂盒);
4.设计引物(该蛋白mRNA序列的开放阅读框上游和下游区)包含构建载体的酶切位点;
5.PCR;
6.PCR产物回收并测序;
7.正确测序结果的片段构建至表达载体;
8.构建好的质粒转化至大肠杆菌,表达成蛋白
4楼2013-05-02 21:44:25
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