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15376763881新虫 (小有名气)
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原核表达重组表达载体的连问题
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| 各位朋友大家好，我最近正在做原核表达一种蛋白，目的片段大小为489bp，用内切酶ECOR1和XHO1,连接到表达载体PET28-A.双酶切质粒和目的片段转化后平板上没有长菌！最终怀疑质粒没切开。然后分别分布酶切了质粒和片段。之后连接，结果长了几十个菌落。开始还挺高兴。可是提取重组质粒后酶切没发现目的片段，只有载体片段，但是做重组质粒pcr能跑出很亮的和目的片段大小片段。。。。我很郁闷啊 ，都做了几个月了不知道原因，求各位高手帮助！感激不尽！ |
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xiaoweiwei121
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