应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转录组测序所需RNA提取
151/2返回列表12下一页
查看: 4510  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

guxiao1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 转录组测序所需RNA提取

各位大神，我现在要做西兰花转录组测序，需要自己提RNA，要求质量很高，提的总是达不到要求，而且貌似杂质很多，有没有什么好的方法解决，或者好的试剂盒？谢谢了哈~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-09 13:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待小丽姐的精彩。 2013-06-30 15:34:54
降解并且有dna污染。
用的tips和离心管，是RNase-free的吗？可以直接买Axygen的，也不贵。
操作的时候要快，并且氯仿，异丙醇提前预冷。
如果有条件，可以用液氮提取法
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2013-03-12 08:34:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guxiao1990 at 2013-03-12 15:51:44
离心管枪头都买的RNASE-free的，网上说的各种要注意的基本都注意了，是步骤有问题么？...

材料新鲜么？
之前有过成功提取经验否？
所有的离心步骤都是4度么？
溶解RNA的水是怎么弄的，可以买个Nuclease-free water， Ambion有售
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-03-12 17:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个还真变态的。我提取同个物种3个阶段的样品，要使用不同的提取方法的。
用了TAKARA的RNAzol和Omega的盒子。
多试几种盒子吧，看看takara的怎么样。
TAKARA的盒子提取时我用LiCl作为沉淀剂，不能用异丙醇。
赞一下(1人) 回复此楼
唯以一人治天下，不以天下奉一人。
10楼2013-06-30 08:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)
其实不要太担心，没有要求那么变态。你能分享一下你提取步骤么？最好能贴个胶图一起看看。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-09 14:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiao1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-09 14:56:50
其实不要太担心，没有要求那么变态。你能分享一下你提取步骤么？最好能贴个胶图一起看看。

这两张图是两次做的，第一张从左到右是marker，拟南芥RNA，西兰花RNA；第二章从右到左是marker，西兰花RNA，拟南芥RNA。 拟南芥的两次都有带，就是带不亮，但是西兰花的基本就看不到带，第二次的还特别亮一大堆不知道是什么东西。

提取步骤：
1.50-100mg加1ml trizol匀浆器研磨，室温静置5min；
2.加0.2ml氯仿，剧烈摇晃15s，室温静置5min，12000rmp4度离心5min；
3.取上层水相转入新EP管，加入0.5ml异丙醇，混匀放于-20度1h，12000rmp离心10min；
4.倒掉上清，加现配预冷1ml75%乙醇震荡洗涤一次，7500rmp离心5min；
5.倒掉上清，晾干，加20uldepc水溶解。

麻烦您分析下到底是什么问题。。。。。

rna   2013  3  6.jpg



rna   2013  3  8.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-11 14:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ahnuzc

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
guxiao1990(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待小丽姐的精彩。 2013-06-30 15:34:41
RNA降解了，注意提取的过程戴手套，勤换手套，要有专门的地方提取RNA。试剂，仪器，耗材，应该都是无RNA酶的。可以选择DEPC水去RNA酶，也可以买无酶的耗材。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-11 16:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiao1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ahnuzc at 2013-03-11 16:11:23
RNA降解了，注意提取的过程戴手套，勤换手套，要有专门的地方提取RNA。试剂，仪器，耗材，应该都是无RNA酶的。可以选择DEPC水去RNA酶，也可以买无酶的耗材。

基本上这些都注意了啊，步骤有问题么？
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-12 15:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiao1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-12 08:34:10
降解并且有dna污染。
用的tips和离心管，是RNase-free的吗？可以直接买Axygen的，也不贵。
操作的时候要快，并且氯仿，异丙醇提前预冷。
如果有条件，可以用液氮提取法

离心管枪头都买的RNASE-free的，网上说的各种要注意的基本都注意了，是步骤有问题么？
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-12 15:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiao1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-12 17:57:28
材料新鲜么？
之前有过成功提取经验否？
所有的离心步骤都是4度么？
溶解RNA的水是怎么弄的，可以买个Nuclease-free water， Ambion有售...

材料都是新取液氮速冻立刻就提了，对了，提完的RNA泛红，是什么情况？含多酚么？
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-12 21:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guxiao1990 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +12 koalala 2026-08-24 14/700 2026-08-24 12:41 by S09300097
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 18/900 2026-08-24 12:03 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +12 kulium 2026-08-21 15/750 2026-08-24 12:02 by iaeyuan
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭