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guxiao1990

新虫 (初入文坛)

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[求助] 转录组测序所需RNA提取

各位大神，我现在要做西兰花转录组测序，需要自己提RNA，要求质量很高，提的总是达不到要求，而且貌似杂质很多，有没有什么好的方法解决，或者好的试剂盒？谢谢了哈~

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1楼 2013-03-09 13:24:35

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guxiao1990

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-09 14:56:50
其实不要太担心，没有要求那么变态。你能分享一下你提取步骤么？最好能贴个胶图一起看看。

这两张图是两次做的，第一张从左到右是marker，拟南芥RNA，西兰花RNA；第二章从右到左是marker，西兰花RNA，拟南芥RNA。拟南芥的两次都有带，就是带不亮，但是西兰花的基本就看不到带，第二次的还特别亮一大堆不知道是什么东西。

提取步骤：
1.50-100mg加1ml trizol匀浆器研磨，室温静置5min；
2.加0.2ml氯仿，剧烈摇晃15s，室温静置5min，12000rmp4度离心5min；
3.取上层水相转入新EP管，加入0.5ml异丙醇，混匀放于-20度1h，12000rmp离心10min；
4.倒掉上清，加现配预冷1ml75%乙醇震荡洗涤一次，7500rmp离心5min；
5.倒掉上清，晾干，加20uldepc水溶解。

麻烦您分析下到底是什么问题。。。。。

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