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grape_vine

金虫 (小有名气)

1, 我觉得用匀浆器对植物来说不合适,应该还是选择液氮研磨.
2, trizol提取拟南芥可以,但是西兰花是不是多糖比较多,所以你提取的杂质比较多.应该选择一个适合多糖多酚的试剂盒,国产的里面可以选择天择的植物多糖多酚RNA提取试剂盒,我们提葡萄效果还不错.
3,楼上的说的都很对,应该非常小心的,低温的操作.但是提取RNA更要防止内源的酶的降解,尤其是在研磨的过程当中,要防止温度回升(低温保护),在磨好以后加入裂解里面的时候要迅速和裂解液混合,使内源酶失活(蛋白变性剂保护),保护RNA。这也是为什么不建议用匀浆器,在你磨的过程中,细胞壁可能破碎的慢,但是细胞已经受损,裂解液又不能充分的进入破碎的细胞,使所有的酶失活,溶酶体里面可能就有酶出来降解RNA了。
11楼2013-07-03 17:08:45
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liuqiuning

木虫 (正式写手)


试试艾德莱的RN38,这个是我用过最好的试剂盒。操作方便,效果很好,我们实验室都说好。
12楼2013-07-08 10:07:13
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lyp_163

铁虫 (初入文坛)

用过CTAB吗?我们实验室用试剂盒或TRIZOL提的不好,用CTAB基本都能解决,不过步骤稍微麻烦一些
13楼2013-12-18 15:40:29
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yedwill

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guxiao1990 at 2013-03-11 14:05:09
这两张图是两次做的,第一张从左到右是marker,拟南芥RNA,西兰花RNA;第二章从右到左是marker,西兰花RNA,拟南芥RNA。 拟南芥的两次都有带,就是带不亮,但是西兰花的基本就看不到带,第二次的还特别亮一大堆不知 ...

先用液氮研磨,然后加Trizol,异丙醇沉淀不需要那么长时间吧?按说明书来即可,跑电泳时间不要太长,电泳液,胶都需要是现配的
14楼2014-06-17 22:44:19
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yedwill

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by guxiao1990 at 2013-03-12 21:59:54
材料都是新取液氮速冻立刻就提了,对了,提完的RNA泛红,是什么情况?含多酚么?...

应该是,可以考虑使用CTAB法试试,TRIZOL有的植物效果不是最好的
15楼2014-06-17 22:45:33
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