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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转录组测序所需RNA提取
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grape_vine

金虫 (小有名气)
1, 我觉得用匀浆器对植物来说不合适,应该还是选择液氮研磨.
2, trizol提取拟南芥可以,但是西兰花是不是多糖比较多,所以你提取的杂质比较多.应该选择一个适合多糖多酚的试剂盒,国产的里面可以选择天择的植物多糖多酚RNA提取试剂盒,我们提葡萄效果还不错.
3,楼上的说的都很对,应该非常小心的,低温的操作.但是提取RNA更要防止内源的酶的降解，尤其是在研磨的过程当中，要防止温度回升（低温保护），在磨好以后加入裂解里面的时候要迅速和裂解液混合，使内源酶失活（蛋白变性剂保护），保护RNA。这也是为什么不建议用匀浆器，在你磨的过程中，细胞壁可能破碎的慢，但是细胞已经受损，裂解液又不能充分的进入破碎的细胞，使所有的酶失活，溶酶体里面可能就有酶出来降解RNA了。
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11楼2013-07-03 17:08:45
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liuqiuning

木虫 (正式写手)
试试艾德莱的RN38，这个是我用过最好的试剂盒。操作方便，效果很好，我们实验室都说好。
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12楼2013-07-08 10:07:13
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lyp_163

铁虫 (初入文坛)
用过CTAB吗？我们实验室用试剂盒或TRIZOL提的不好，用CTAB基本都能解决，不过步骤稍微麻烦一些
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13楼2013-12-18 15:40:29
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yedwill

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by guxiao1990 at 2013-03-11 14:05:09
这两张图是两次做的，第一张从左到右是marker，拟南芥RNA，西兰花RNA；第二章从右到左是marker，西兰花RNA，拟南芥RNA。 拟南芥的两次都有带，就是带不亮，但是西兰花的基本就看不到带，第二次的还特别亮一大堆不知 ...

先用液氮研磨，然后加Trizol,异丙醇沉淀不需要那么长时间吧？按说明书来即可，跑电泳时间不要太长，电泳液，胶都需要是现配的
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14楼2014-06-17 22:44:19
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yedwill

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by guxiao1990 at 2013-03-12 21:59:54
材料都是新取液氮速冻立刻就提了，对了，提完的RNA泛红，是什么情况？含多酚么？...

应该是，可以考虑使用CTAB法试试，TRIZOL有的植物效果不是最好的
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15楼2014-06-17 22:45:33
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