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[求助]
转录组测序所需RNA提取
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| 各位大神，我现在要做西兰花转录组测序，需要自己提RNA，要求质量很高，提的总是达不到要求，而且貌似杂质很多，有没有什么好的方法解决，或者好的试剂盒？谢谢了哈~ |
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1, 我觉得用匀浆器对植物来说不合适,应该还是选择液氮研磨. 2, trizol提取拟南芥可以,但是西兰花是不是多糖比较多,所以你提取的杂质比较多.应该选择一个适合多糖多酚的试剂盒,国产的里面可以选择天择的植物多糖多酚RNA提取试剂盒,我们提葡萄效果还不错. 3,楼上的说的都很对,应该非常小心的,低温的操作.但是提取RNA更要防止内源的酶的降解，尤其是在研磨的过程当中，要防止温度回升（低温保护），在磨好以后加入裂解里面的时候要迅速和裂解液混合，使内源酶失活（蛋白变性剂保护），保护RNA。这也是为什么不建议用匀浆器，在你磨的过程中，细胞壁可能破碎的慢，但是细胞已经受损，裂解液又不能充分的进入破碎的细胞，使所有的酶失活，溶酶体里面可能就有酶出来降解RNA了。 |
11楼2013-07-03 17:08:45
gaoyang636
木虫 (著名写手)
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2楼2013-03-09 14:56:50
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这两张图是两次做的，第一张从左到右是marker，拟南芥RNA，西兰花RNA；第二章从右到左是marker，西兰花RNA，拟南芥RNA。 拟南芥的两次都有带，就是带不亮，但是西兰花的基本就看不到带，第二次的还特别亮一大堆不知道是什么东西。 提取步骤： 1.50-100mg加1ml trizol匀浆器研磨，室温静置5min； 2.加0.2ml氯仿，剧烈摇晃15s，室温静置5min，12000rmp4度离心5min； 3.取上层水相转入新EP管，加入0.5ml异丙醇，混匀放于-20度1h，12000rmp离心10min； 4.倒掉上清，加现配预冷1ml75%乙醇震荡洗涤一次，7500rmp离心5min； 5.倒掉上清，晾干，加20uldepc水溶解。 麻烦您分析下到底是什么问题。。。。。  rna 2013 3 6.jpg  rna 2013 3 8.jpg |
3楼2013-03-11 14:05:09
4楼2013-03-11 16:11:23