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转录组测序所需RNA提取
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| 各位大神，我现在要做西兰花转录组测序，需要自己提RNA，要求质量很高，提的总是达不到要求，而且貌似杂质很多，有没有什么好的方法解决，或者好的试剂盒？谢谢了哈~ |
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1, 我觉得用匀浆器对植物来说不合适,应该还是选择液氮研磨. 2, trizol提取拟南芥可以,但是西兰花是不是多糖比较多,所以你提取的杂质比较多.应该选择一个适合多糖多酚的试剂盒,国产的里面可以选择天择的植物多糖多酚RNA提取试剂盒,我们提葡萄效果还不错. 3,楼上的说的都很对,应该非常小心的,低温的操作.但是提取RNA更要防止内源的酶的降解，尤其是在研磨的过程当中，要防止温度回升（低温保护），在磨好以后加入裂解里面的时候要迅速和裂解液混合，使内源酶失活（蛋白变性剂保护），保护RNA。这也是为什么不建议用匀浆器，在你磨的过程中，细胞壁可能破碎的慢，但是细胞已经受损，裂解液又不能充分的进入破碎的细胞，使所有的酶失活，溶酶体里面可能就有酶出来降解RNA了。 |
11楼2013-07-03 17:08:45